一种高通量载体构建方法

摘要

一种高通量载体构建方法，使用96孔PCR板，进行扩增、纯化、浓度测定、BP反应、BP克隆、单克隆培养及质粒提取、LR反应、LR克隆的构建步骤，相对目前单个载体构建而言，实现了高通量、集约化、高效率和低成本等优点。

主权项

一种高通量载体构建方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：（1）将不同模板的待捕获的目标基因加入在一块96孔PCR板上，进行高通量PCR，进行纯化；（2）测定纯化后的产物浓度；（3）将产物转移至96孔BP反应预制板，与配置在所述96孔BP反应预制板的BP反应混合液进行BP反应；（4）将BP产物转移至感受态细胞板中，进行BP产物转化；（5）将BP产物转化后的细胞转移至大型LB固体培养基上，进行画线分离单克隆；（6）将BP反应单克隆挑取，并培养后转移至96孔PCR克隆鉴定预制板，进行BP产物克隆鉴定；（7）将鉴定后的阳性克隆转移至96深孔板中，培养后提取BP克隆质粒，并测定BP克隆质粒浓度；（8）将产物转移至96孔LR反应预制板，进行LR反应；（9）将LR产物转移至感受态细胞板中，进行LR产物转化；（10）将LR产物转化后的细胞转移至大型LB固体培养基，进行画线分离单克隆；（11）将LR反应单克隆挑取，并培养后转移至96孔PCR克隆鉴定预制板，进行LR产物克隆鉴定；（12）将鉴定后的LR阳性克隆转移至96深孔板中，培养后提取LR产物克隆质粒，并测定LR克隆质粒浓度。