用于生成致密TALE-核酸酶的方法及其用途

摘要

本发明涉及一种用于生成可有效地靶向并加工双链DNA的致密转录激活物样效应物核酸酶（Transcription Activator-Like Effector Nuclease，TALEN）的方法。更具体地，本发明涉及一种用于产生TALEN的方法，所述TALEN由与至少一个催化结构域融合的单一TALE DNA结合结构域组成，使得活性实体由单一多肽链构成用于单一和有效载体化，并且不需要二聚化以靶向特定的目标单一双链DNA靶标序列和加工所述DNA靶标序列附近的DNA。本发明还涉及用于实施所述方法的致密TALEN、载体、组合物和试剂盒。

主权项

一种用于靶向和加工双链DNA的方法，其包括：（a）在双链DNA的一条链中选择一条目的DNA靶标序列；（b）提供包含以下的独特的致密TALEN单体：（i）一个核心TALE支架，所述核心TALE支架包含对所述目的DNA靶标序列具有DNA结合特异性的重复可变二肽区（RVD）；（ii）至少一个催化结构域，其中所述催化结构域当与来自（i）的所述核心TALE支架的C和/或N端融合时能够加工距所述目的DNA靶标序列几个碱基对远的DNA；（iii）任选的一个肽接头，所述肽接头在需要时使来自（ii）的所述催化结构域与来自（i）的所述核心TALE支架融合；其中所述致密TALEN单体装配成结合并加工所述双链DNA而不需要二聚化；（c）使所述双链DNA与所述独特的单体相接触，使得所述双链在3’和/或5’方向上在距所述一条链靶标序列几个碱基对远处被加工。