一种从萝卜发酵液中分离花色苷色素和乳酸的方法

摘要

本发明公开了一种从萝卜发酵液中同时提取花色苷色素和乳酸的方法，所述方法通过利用植物乳杆菌对萝卜进行发酵，并通过柱层析对发酵液进行分离从而可同时提取到花色苷色素和乳酸；所述方法制得的色素和乳酸得率高、分离效果好、且工艺简便，适合工业上大规模制备。

主权项

一种从萝卜中同时提取萝卜花色苷色素和乳酸的方法，包括如下步骤：（1）菌种活化扩培乳酸菌的活化：将购买于中国科学院微生物研究所，菌号为CICC22696的冷冻植物乳杆菌的菌种解冻后，接种到300mL土豆培养基上，在30℃培养18～24h得富含活化菌种的土豆培养基；乳酸菌的扩培：将所述富含活化菌种的土豆培养基扩培到新的土豆培养基中，在30℃培养18‑24h即可用于萝卜接种；（2）预处理、发酵将萝卜洗净、削皮，然后在95～100℃水中烫漂3min进行灭酶，加热后迅速冷却到10～20℃；灭酶后的萝卜皮和8g/100mL的无菌盐水按照3g︰7ml的质量体积比装入已灭菌的发酵罐中；接着，按体积比5%，将扩培后的植物乳杆菌接种到发酵罐里；（3）发酵终止发酵7～14天后，收集发酵液，并进行高温灭菌处理；（4）初步纯化将灭菌后的发酵液离心，收集上清液；（5）萝卜花色苷色素和乳酸的分离用6mol/L的盐酸将所述（4）中上清液pH值调整到pH<3得到酸化的上清液，然后利用高分子填充材料层析柱分离色素和乳酸，加样顺序依次为：所述酸化的上清液、含0.01%（v/v）盐酸的去离子水、含0.01%（v/v）盐酸的乙醇水溶液，分别收集洗脱液：乙醇收集液（A）富含色素物质，其它收集液（B）富含乳酸物质，所述乙醇水溶液的浓度为80～100%（v/v）；（6）萝卜花色苷色素和乳酸的精制将所述乙醇收集液（A）离心，收集上清液，真空浓缩至体积小于原有体积的四分之一，再进行离心，收集上清液，加入乙醇或乙醇水溶液，使最终乙醇浓度大于80%（v/v），进行醇沉、离心、蒸发浓缩至体积小于原有体积的四分之一，如此反复1～4次，然后蒸干得到暗红色粉末即所述萝卜花色苷色素；将所述其它收集液（B）进行浓缩、离心，收集上清液，然后用乙醇进行醇沉，离心，收集上清液，再进行浓缩至除去所有乙醇，即得到纯化的乳酸浓缩液，通过真空干燥或冷冻干燥得到粉末物质即所述乳酸；所述（1）中所述300mL土豆培养基上接种量为2～3环，所述富含活化菌种的土豆培养基与所述新的土豆培养基的体积比为5%；所述土豆培养基制作方法为：煮沸500mL水，然后称取洗净并切好的土豆块120g，煮沸并保温30分钟，然后进行过滤，再加入12g白砂糖，将滤液分装入两个锥形瓶，每个用去离子水定量到300mL；然后用包有纱布的橡皮塞封住瓶口，再用报纸包裹起来，并用橡皮筋捆好，放入灭菌锅灭菌2小时；其中，所述（5）中所述高分子填充材料为大孔吸附树脂或C18树脂。