用于产生病毒疫苗的源自鸭胚胎的干细胞系

摘要

本发明涉及开发和生产病毒疫苗。特别地，本发明涉及病毒载体和疫苗的工业生产的领域，更特别地涉及禽胚胎干细胞，优选为源自鸭胚胎干细胞的细胞系在生产病毒载体和病毒之中的用途。本发明特别用于防止人类和动物病毒感染的病毒疫苗的工业生产。

主权项

一种获得源自禽胚胎干细胞的持续的双倍体禽细胞系的方法，其中所述禽细胞系不产生有复制能力的内源性逆转录病毒颗粒，且能够在不含生长因子、动物血清和/或饲养层的基础培养基中增殖，所述方法包括以下步骤：a)在Eyal‑Giladi分类的VIII期至X期的发育阶段分离鸟胚胎，其中所述鸟的基因组中不含有易于产生有复制能力的内源性逆转录病毒颗粒的内源性前病毒序列，所述鸟是鸭或ev‑0家鸡；b)在基础培养基中悬浮通过分离步骤a)中的胚胎获得的胚胎干细胞，所述培养基添加以下物质：‑作为仅有的生长因子的胰岛素生长因子1和睫状神经营养因子；和‑动物血清；c)将步骤b)中获得的胚胎干细胞悬浮液植于饲养细胞层上并继续培养胚胎干细胞至少一个传代；d)在一个传代同时从培养基中除去胰岛素生长因子1和睫状神经营养因子，并继续培养细胞至少一个传代；e)逐步降低培养基中饲养细胞的浓度，以在几个传代之后完全除去饲养层，并继续培养细胞；f)获得能够在不含生长因子、饲养层的基础培养基中增殖的源自胚胎干细胞的粘附性禽类细胞系，且其中所述持续的双倍体禽细胞系不产生有复制能力的内源性逆转录病毒颗粒。