一种奶牛瘤胃上皮组织总蛋白的提取方法

摘要

本发明涉及一种动物组织蛋白的提取方法，具体是涉及一种奶牛瘤胃上皮组织总蛋白的提取方法。将奶牛瘤胃上皮组织样品置于预冷的研钵中，添加液氮并研磨至粉末，加入预冷三氯乙酸的丙酮溶液，振荡涡旋混匀放置过夜，离心收集沉淀；冻干该组织沉淀，再加入裂解液，孵育并间隔涡旋，离心收集上清液，即奶牛瘤胃上皮组织总蛋白。本发明的方法所提取的奶牛瘤胃上皮组织总蛋白可采用二维凝胶电泳技术将总蛋白混合物依据蛋白质的等电点和分子量分离，同时获取了蛋白质的相对丰度，可在凝胶图谱中清楚直观的呈现每个蛋白质的等电点、分子量以及相对表达量，具有比高效液相色谱分离方法、酶联免疫法和免疫印迹等传统技术更明显的整体性和可视化的优势。

主权项

一种奶牛瘤胃上皮组织总蛋白的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：1)、将奶牛瘤胃上皮组织样品置于预冷的研钵中，添加液氮并研磨至粉末，将该组织粉末移至离心管中；2)、在离心管中加入预冷的3～5倍组织粉末体积的10％三氯乙酸的丙酮溶液，振荡涡旋混匀后‑20℃放置过夜，离心弃去液相部分，收集沉淀A；3)、向该组织沉淀A中加入其3～5倍体积的80％冷丙酮溶液，充分涡旋振荡，‑20℃放置0.5～2h，然后离心弃去液相部分，收集沉淀B；4)、冻干该组织沉淀B，再加入等体积的裂解液，于4℃孵育并间隔涡旋20～40min，离心收集上清液，即奶牛瘤胃上皮组织总蛋白。