一种新型的低温脂肪酶

摘要

本发明提供了一种新型低温脂肪酶，提供了该低温脂肪酶的基因序列，经过对该低温脂肪酶的提取、分离纯化及酶学性质的研究确定了该低温脂肪酶的酶学性质：最适温度为30℃，在0℃仍具有65％的相对酶活；最适PH＝10.0，且在pH＝3.0-10.5范围内稳定性较好；60℃下保温40min，仍有65％剩余酶活，热稳定性好；蛋白分子量为36kDa；最适作用底物为p-NPB等等，是一种新的低温脂肪酶，可广泛应用于洗涤剂、食品工业、造纸、医药、皮革及环境保护领域。同时还提供了该低温脂肪酶的发酵制备方法和发酵菌种的16S rRNA基因序列，属于生物技术领域。

主权项

一种新型的低温脂肪酶，具有如下的酶学特征：1.1分子量为36kDa；1.2最适pH为10.0，属于碱性脂肪酶；其中：1.2.1PH对酶活性的影响表现为pH 10.5时仍保有pH 10.0时90％的酶活；pH 8.0时的酶活仅为pH 10.0时的20％；1.2.2PH对酶稳定性的影响则在pH 3.0‑10.5的范围内均表现比较稳定，pH适应范围比较广；1.3该脂肪酶酶活在0‑30℃之间随着温度的增加而增加，在30℃时达到最大。此外，在0℃时酶活仍有最大值的60％左右，属于低温脂肪酶。在70℃还保持50％左右的酶活；1.4Na+、Mg2+对脂肪酶的活力有明显的促进作用，在10mmol/L金属盐离子浓度时，可提高近一倍的酶活力；Cu2+和Zn2+对脂肪酶的活力有明显的抑制作用；1.5非离子型表面活性剂Tween‑40和Tween‑60对脂肪酶活性有显著的的激活作用；Tween‑80对脂肪酶的活性有一定的抑制作用；其他表面活性剂对脂肪酶的催化活性改善作用不明显；1.6低浓度乙醚、异戊醇及正丁醇能刺激酶活的升高，随浓度的升高，产生抑制的影响，仍能但酶活仍能保持90％以上；2‑丁酮、丙酮对脂肪酶酶活有很强的抑制作用。可以看出该脂肪酶对弱极性有机溶剂有较好的耐受性；1.7脂肪酶的Km值为0.120mmol/L，最大反应速度Vmax为400U/mg，Kcat为240S‑11.8脂肪酶对底物p‑NPB，p‑NPA，p‑NPC，p‑NPP表现出不同的水解能力；以p‑NPB、p‑NPC(C4‑C8)为底物测定时表现较高的酶活，而以p‑NPA(C2)和 p‑NPP(C16)为底物测定时，酶活较低，可见该脂肪酶对中长链脂肪的水解能力较强。