载体pGEMT/rhPA及其构建方法、在高效重组人纤溶酶原激活剂制备方法中的应用

摘要

载体pGEMT/rhPA及其构建方法、在高效重组人纤溶酶原激活剂制备方法中的应用，属于生物工程领域的基因工程和细胞工程技术，本发明采用先构建pGEMT/5’P载体，再构建pGEMT/5’+3’P载体，最后构建成于9203－10269位置共1068bp，其中编码356个氨基酸的pGEMT/rhPA载体，试验证明其表达的重组产物具有含量高、比活性高的优点，可用于开发人溶血栓药。

主权项

一种载体pGEMT/rhPA，其DNA序列为：tcgactctag agggacagcc cccccccaaa gcccccaggg atgtaattac gtccctcccc  60cccgagccgg cagcgtgcgg ggacagcccg ggcacgggga aggtggcacg ggatcgcttt  120cgctaggggc agcagcgagc cgcccggggc tccgctccgg tccggcgctc cccccgcatc  180cctctgaacg cttctcgctg ctctttgagc ctgcagacac ctggggggat acggggaaaa  240agctttaggc tgaaagagag atttagaatg acagaatcat agaacggcct gggttgcaaa  300ggagcacagt gctcatccag atccaacccc ctgctatgtg cagggtcatc aaccagcagc  360cagcctcctt gggcaacctg ttcagtgcgt caccaccctc tgggggaaaa actgcctcct  420ccaggctgcc cagagccaca tccagcctgg ccttgaatgc ctgcagggat ggggcatcca  480catatccaac ccaaacctcc cctgtctcag tgtaaagcca ttcccccttg tcctatcaag  540ggggagtttg ctgtgacatt gttggtctgg ggtgacacat gtttgccaat tcagtgcatc  600acggagaggc agatcttggg gataaggaag tgcaggacag catggacgtg ggacatgcag  660aagataggat agaaggacaa agagcaagtt aaaacccagc atggagagga gcacaaaaag  720gtgttgaggg ctctgggaca ctctccaagt cacagcgttc agaacagcct taaggataag  780gccacagaca ctgctggtcc ctgtgtctga gcctgcatgt ttgatggtgt ctggatgcaa  840gcagaagggg tggaagagct tgcctggaga gatacagctg ggtcagtagg actgggacag  900gcagctggag aattgccatg tagatgttca tacaatcgtc aaatcatgaa ggctggaaag  960cctccaagat ccccaagacc aaccccaacc cacccaccgt gcccactggc catgtccctc  1020agtgccacat ccccacagtt cttcatcacc tccagggacg gtgacccccc cacctccgtg  1080ggcagctgtg ccactgcagc accgctcttt ggagaaggta aatcttgcta aatccagccc  1140gaccctcccc tggcacaacg taaggccatt atctctcatc caactccagg acggagtcag  1200tgaggatggg gctctagagg gacagccccc ccccaaagcc cccagggatg taattacgtc  1260cctcccccgc taggggcagc agcgagccgc ccggggctcc gctccggtcc ggcgctcccc  1320ccgcatcccc gagccggcag cgtgcgggga cagcccgggc acggggaagg tggcacggga  1380tcgctttcct ctgaacgctt ctcgctgctc tttgagcctg cagacacctg gggggatacg  1440ttgcaaagga gcacagtgct catccagatc caaccccctg ctatgtgcag ggtcatcaac  1500gggaaaaagc tttaggctga aagagagatt tagaatgaca gaatcataga acggcctggg  1560cagcagccca ggctgcccag agccacatcc agcctggcct tgaatgcctg cagggatggg  1620gcatccacag cctccttggg caacctgttc agtgcgtcac caccctctgg gggaaaaact  1680gcctcctcat atccaaccca aacctcccct gtctcagtgt aaagccattc ccccttgtcc  1740tatcaagggg gagtttgctg tgacattgtt ggtctggggt gacacatgtt tgccaattca  1800gtgcatcacg gagaggcaga tcttggggat aaggaagtgc aggacagcat ggacgtggga  1860catgcaggtg ttgagggctc tgggacactc tccaagtcac agcgttcaga acagccttaa  1920ggataagaag ataggataga aggacaaaga gcaagttaaa acccagcatg gagaggagca  1980caaaaaggcc acagacactg ctggtccctg tgtctgagcc tgcatgtttg atggtgtctg  2040gatgcaagca gaaggggtgg aagagcttgc ctggagagat acagctgggt cagtaggact  2100gggacaggca gctggagaat tgccatgtag atgttcatac aatcgtcaaa tcatgaaggc  2160tggaaagcct ccaagatccc caagaccaac cccaacccac ccaccgtgcc cactggccat  2220gtccctcagt gccacatccc cacagttctt catcacctcc agggacggtg acccccccac  2280ctccgtgggc agctgtgcca ctgcagcacc gctctttgga gaaggtaaat cttgctaaat  2340ccagcccgac cctcccctgg cacaacgtaa ggccattatc tctcatccaa ctccaggaac  2400ggagtcagtg aggatggggc tctagaggat ccctcgacct gcaggtcaac ggatcacaac  2460aaactggaaa attcttcaag agaagaatac cagaccaccc tacctgcttc ctgagaaatc  2520tgtttgctgc tcagaagcaa cagttagaac cagacatgga acaacagact ggttccaaat  2580caggaaagga gtatgtcaag gctgtatatc gtcaccctga ttatttaact tatatgcata  2640gtacataata caaaatgcca ggctggatga atcgcaagct ggaatcaaga tttctgggag  2700aaatatcaat aaacgagata caaagataca ccacacttat ggcagaaaac taagaagaac  2760taaagagcct cttgatgaaa gtgaaagagg agagtgaaaa agccagctta aaacccaaca  2820ttcaaaatca agatcatcat ttcatggcaa ataaatgggg aaacaatgga aacagtgaga  2880gactttattt tcttgggctc caaaatcact gcagattgtg actacagcca tgattaaaag  2940atgcttgctc cttggaagag aagctattac caaactagaa agcatattaa aaagcagaga  3000cgttactttg ctgactaagt tctgtctagt caaacctatg gtttttccag tagtcatata  3060tggatgtgag ttgaactata aagaaagctg agcaccaaag aattgatgct tttgaaattt  3120ggtgttggag aagtctcttg agagtccctt gaacctgcaa ggagatccaa ccagtccatc  3180ctaaaggaaa tcagtcctga atattcattg gaaggactga tgctgaaatt gaagattaac  3240gttttggact cacctaatgc agaagagcca actcactaga aaagacccca tgttggcaaa  3300aattgaagcc aggaagagaa gtgaatgaca gaggatgaga tggttggatg gcatcgttga  3360ctgaatggac atgagtctga tcaagttccg ggagacagca aaggacaggg ctgcctggtc  3420tgctgcagtc catggggttg caaagagtcg gtctcaaatg agtaactaaa caacaaccaa  3480gcagtagaaa aataaataaa atttgtctct gagatctcag tacctctttc tgtgcatatc  3540cgtctcctgt tattgtactt tgtcttctgc ttgtaataaa gctgtcctgt tagtaaaatc  3600ccacctctga gtaatataca gagaataaaa gaagggagaa attatgtgca agttctctct  3660tgtttgggtc ctctgaattc ttttagctat caaaaatgga aggtgattat tgtgcaatgt  3720catctcctgc ttctcattta aaagattcta cctcagtggg ggctaaaact ccacatttaa  3780cagtagcaaa aaccaatatt ccatagcttc ttaggaaacc attttttata ctcttgtatg  3840taattacatt caagctcaaa agcaaagaag tgattctgcg ttggtgaagg cccaaccata  3900gaaaagagga agaaaatagg ccacatactg tgcttccccc atagctcagt tggtaaagaa  3960tctacctaca atgcaggagg cctgggcttg atccctgggt aagggagatc ccctggagaa  4020ggaaatggta acccactcca gtactcttgc ctgtaaatcc catggacgga ggagcctggc  4080agctacagcc ttggggtggc aagagttgga catgattaac aactaaacca ctgccaccac  4140tccacatact gagtgctccc cagtggcact agtggtaaag aaccacctgc cggtgcagaa  4200gacattaaag acactggctc ta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