一种保持生物活性医用胶原的制备方法及其应用

摘要

本发明涉及一种保持生物活性的I型医用胶原材料的提取方法，其特点在于综合利用酸法、碱法和酶法，在严格控制温度、pH值、反应时间及控制蛋白酶用量的条件下，生产出保持胶原特有生物活性、低免疫原性、高生物相容性的高纯度医用胶原材料，该方法提取的医用胶原收率达到90％以上，纯度达到99％以上，且适合工业化大规模生产。该材料可用于生产高档止血材料、骨融合材料、组织再生膜片、注射美容用活性胶原溶液等。

主权项

一种保持生物活性I型医用胶原材料的制备方法，其特征在于：1)、原料前处理：选取新宰杀牛的牛跟腱，运输过程在冰水中保存，到达加快处理地后，立即加工处理，用剪刀去除多余组织，放置于‑20度冰箱中冷冻，后用刀片刮去表面多余的筋膜，用铝箔捆扎成10mm大小圆柱状，放置于冰箱中冷冻存放，备用。2)、胶原提取：A、取冷冻后的牛跟腱，切制成0.5‑2毫米厚的薄片，用5％‑20％的NaCl溶液浸泡15‑30min，再用0.5％的KH2P4温度在0‑5℃的溶液浸泡1‑3h，用纯化水冲洗至PH值为中性，后加入乙醇和三氯乙烷混合液(1∶1)浸泡，在缓慢搅拌条件下脱脂1‑3小时，得预处理原料。B、原料用纯化水冲洗后加入含23％NaCl‑0.05mol/L Tris‑HCl(PH值7.5)缓冲液浸泡3h，期间随时吸取液面上的油脂，至无脂质浮在液面。C、后用组织破碎机将片状跟腱进行破碎，调节溶液PH值至6.8，加入1∶100无花果酶，4℃条件下缓慢搅拌5小时，反复冲洗后用1％的H2O2处理4h后清洗。D、将以上所得胶原加入饱和NaCl溶液中(PH7.0‑7.2)，在4℃条件下静置6‑24小时，后加入1M的NaOH溶液和0.5M氯化铵溶液浸泡，15‑20℃条件下静置36小时，最后用HCl进行中和，调节PH值至7.2，搅拌条件下用纯化水冲洗3次，再用pH为6.8的注射用水在5℃温度下浸泡3小时，滤过，除去多余水份，冷冻保存，即得。