一种全基因组DNA甲基化的导向测序技术

摘要

本发明涉及一种全基因组DNA甲基化的导向测序技术。本发明提供了一种新的核酸甲基化的测定方法。具体地说提供了一种核酸甲基化检测的“定位”理念，即测序时部分序列用来定位，另一部分序列用于甲基化的检测，从而彻底解决了全基因组甲基化检测及生物信息学分析时遇到的定位问题。

主权项

一种核酸甲基化的测定方法，其特征在于，所述的核酸是双链，所述方法包括：(1)针对核酸双链，利用具有3’→5’方向切割功能的聚合酶或3’→5’核酸外切酶处理，使两条链分别在3’端产生80‑200个碱基缺失；(2)加入dNTP，其中的胞嘧啶为甲基化修饰的胞嘧啶，使双链3’端的缺失被补平且其中的胞嘧啶为甲基化修饰的胞嘧啶；(3)处理步骤(2)的双链，使未被甲基化修饰的胞嘧啶转变为尿嘧啶、甲基化修饰的胞嘧啶则不变；(4)PCR扩增，进行甲基化测序，其中一部分序列中未甲基化的胞嘧啶已转变为胸腺嘧啶，用于判断甲基化位点；另一部分序列因胞嘧啶发生甲基化而与原核酸序列相同，用于数据分析时的序列定位；将两部分序列比对，从而得知核酸的甲基化状况。