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一种甲胎蛋白的定量检测方法，该方法由以下步骤组成：（1）分别按下述方法制备酶标抗体和负载抗体的纳米金磁微粒：（1.1）制备酶标抗体：取8μL糖化酶溶于0.2mL体积浓度为1.25%的戊二醛，室温结合3h后用除盐柱去除游离的戊二醛，得醛化糖化酶溶液；先将0.1mg甲胎蛋白抗体溶于13μL0.15mol/L NaCl，再与所得到的醛化糖化酶溶液混合后，加入1mol/L pH9.6的碳酸盐缓冲液，调节pH至9.0‑9.5，4℃下结合12h后加入4μL0.2mol/L赖氨酸，终止反应后4℃放置2h；（1.2）制备负载抗体的纳米金磁微粒：取粒径为50nm的纳米金磁微粒5mg，用去离子水洗三遍，加入NaOH调pH至9.0，然后依次加入0.2mg甲胎蛋白抗体和30mg牛血清白蛋白，4℃下反应6h，外加磁性条件下磁性分离，洗涤，得到负载抗体的纳米金磁微粒；（2）分别按下述方法进行定量线性方程的建立和甲胎蛋白抗原样品的检测：（2.1）定量线性方程的建立：取甲胎蛋白抗原标准品，先按相同体积配制一系列不同浓度的抗原标准品溶液，再分别将每一抗原标准品溶液50μL加入到步骤（1.2)所得负载抗体的纳米金磁微粒的免疫反应界面中，先37℃温育30min，洗涤；将步骤(1.1)制备的酶标抗体配成80μg/ml悬液，在金磁纳米免疫反应界面中滴加50μL酶标抗体悬液，37℃温育30min，去离子水洗涤；然后，往所述免疫反应界面加入浓度为20mg/mL的液化淀粉溶液10μL，60℃下反应30min后用血糖仪测得葡萄糖的浓度；最后，采用平均斜率法以葡萄糖浓度对抗原标准品溶液浓度进行线性回归便得到葡萄糖浓度与甲胎蛋白浓度对应关系的线性方程；其中，所述的液化淀粉溶液是先将淀粉用PBS调成20mg/mL的淀粉溶液并煮沸，然后按淀粉溶液︰耐高温α‑淀粉酶=500︰3的体积比加入耐高温α‑淀粉酶得到；（2.2）甲胎蛋白抗原样品的检测：将甲胎蛋白抗原样品加入到金磁纳米免疫反应界面中，采用与步骤（2.1）中所述检测甲胎蛋白抗原标准品中葡萄糖浓度的同样方法和反应条件，用血糖仪测得甲胎蛋白抗原样品中的葡萄糖浓度；然后，将甲胎蛋白抗原样品的葡萄糖浓度值代入步骤（2.1）所得到的线性方程中即可算出甲胎蛋白抗原样品的甲胎蛋白浓度。 |
