酶切法制备寡聚透明质酸盐的方法及所得寡聚透明质酸盐和其应用

摘要

本发明公开了酶切法制备寡聚透明质酸盐的方法及所得寡聚透明质酸盐和其应用，以芽孢杆菌（Bacillus sp.）A50 CGMCC NO.5744发酵培养得到的芽孢杆菌透明质酸酶对透明质酸或其盐进行降解，包括配制透明质酸或其盐溶液、酶解、灭活、过滤、沉淀、脱水干燥步骤。本发明利用芽孢杆菌产生的透明质酸酶降解透明质酸或其盐，经过除酶、醇或酮沉淀、脱水干燥而成，此法操作简单，条件温和，对产品结构无破坏，无环境污染，而且发酵来源的透明质酸酶成本低，适合大规模工业化生产，制备的寡聚透明质酸盐具有透皮吸收性好、纯度高、无细胞毒性、抗氧化能力强等优点，可用在化妆品、食品及医药领域。

主权项

1.一种酶切法制备寡聚透明质酸盐的方法，其特征是：以芽孢杆菌（Bacillus sp.）A50 CGMCC NO.5744发酵培养得到的芽孢杆菌透明质酸酶对透明质酸或其盐进行降解，将透明质酸酶解至分子量为3000~10⁴Da，不包括10⁴Da；包括以下步骤：配制透明质酸或其盐溶液：向纯化水中加入分子量大于10kDa的透明质酸或其盐，配制成质量体积浓度为1~30%的溶液；酶解：调节步骤①中溶液的温度为20~48℃、pH为4~9，然后向其中加入芽孢杆菌透明质酸酶，将透明质酸或其盐酶解至所需分子量，得酶解液；灭活：将酶解液在50~90℃下保持10~60min，对芽孢杆菌透明质酸酶进行灭活；过滤：向灭活后的酶解液中加入易溶性无机盐，搅拌至完全溶解，然后用孔径为0.45μm的滤膜过滤，得滤液，每100mL酶解液中加入0.1~10g的易溶性无机盐；沉淀：向步骤④的滤液中加入滤液体积3~20倍的醇或酮，混合均匀，得到寡聚透明质酸盐沉淀；脱水干燥：将步骤⑤中的寡聚透明质酸盐沉淀分离出来，用有机溶剂脱水，然后真空干燥，得寡聚透明质酸盐。