一种快速鉴别葎草性别的分子生物学方法

摘要

本发明涉及一种快速鉴别葎草性别的分子生物学方法，属于分子生物学技术领域。具体实施过程是，利用设计的特异引物序列，以葎草个体基因组DNA为模板进行PCR扩增，反应体系为25μL，反应组成为1U的TaqDNA聚合酶，2μL的dNTP，100-200ng的基因组DNA，在PCR仪上进行PCR扩增，扩增产物以1.5％琼脂糖凝胶电泳分离，溴化乙锭染色，在凝胶成像系统下观察并拍照记录，DL2000marker作分子量标记，出现大小为153bp目的带的是雄性个体，没有条带的即为雌性个体。本发明中所述的SCAR引物用于预测葎草的性别，为鉴定葎草性别提供简便稳定的分子标记，在生产方面和人类健康方面具有重要应用价值。

主权项

一种快速鉴别葎草性别的分子生物学方法，其特征在于：包括葎草雄性特异性引物序列，其特异性引物序列为：上游(SCARF)：5’‑TTGAAGAAATCTCATCCTCAAAGA‑3’；下游(SCAP R)：5’‑GACCTTGGCCACAGGAATAG‑3’；该方法的具体实施过程为：利用上述设计的特异引物序列，以葎草个体基因组DNA为模板进行PCR扩增，反应体系为25μL，反应组成为1U的Taq DNA聚合酶，2μL的dNTP，100‑200ng的基因组DNA，其中含雄性特异上下游引物各0.1μmol/L，在PCR仪上按下面的循环参数进行PCR扩增：95℃预变性5min后，95℃变性30sec，60℃退火30sec，72℃延伸60sec，共30个循环，最后72℃延伸7min，扩增产物以1.5％琼脂糖凝胶电泳分离，溴化乙锭染色，在凝胶成像系统下观察并拍照记录，DL2000marker作分子量标记，出现大小为153bp目的带的是雄性个体，没有条带的即为雌性个体。