从人血浆组分四沉淀制备高纯Apoa-I的生产工艺

摘要

本发明公开了一种从血浆组分四沉淀中制备高纯度载脂蛋白Apoa-I的生产工艺，是通过一步离心加一步离子柱层析法从血浆组分四沉淀中制备高纯度Apoa-I。本发明的生产工艺具有设备简单、操作方便、步骤少、生产周期短、蛋白回收率高、适于工业化大规模生产等优点。

主权项

一种从人血浆组分四沉淀中分离Apoa‑I的方法，包括下列步骤：（1）将组分四沉淀溶解于pH5.5～11.0的缓冲液中；（2）在悬浮液中加入重量百分比为0.2～6%的氯化钠，调解pH值至酸性，降温至‑3～20℃析出沉淀，而后高速离心，收集沉淀，获得Apoa‑I沉淀，弃上清液；（3）复溶Apoa‑I沉淀：将Apoa‑I沉淀溶解于pH5.5～11.0的缓冲液中，然后用微孔滤膜过滤；（4）病毒灭活处理；（5）柱层析：先将经步骤（4）处理的Apoa‑I滤液上阴离子层析柱，所述阴离子层析柱为DEAE FF阴离子层析柱，然后用含2‑8M尿素的缓冲液洗脱层析柱并收集洗脱液，获得电泳纯的Apoa‑I溶液；（6）将洗脱收集液进行超滤，加稳定剂，调pH值后进行无菌过滤，后罐装；所述血浆组分四是人血浆经Cohn低温乙醇法处理后的剩余部分；步骤（1）中溶解用缓冲液及步骤（3）中复溶用缓冲液均选自醋酸盐缓冲液、tris缓冲液或磷酸盐缓冲液。