快速获得转基因小麦纯合植株的方法

摘要

本发明涉及一种转基因小麦的快速纯合方法，采用目的基因取代基础质粒pAHC25的gus基因,使目的基因与抗除草剂bar基因紧密连锁；将获得的重组质粒通过小麦基因枪转化方法导入小麦；对小麦转基因植株及其后代开花15天后的幼胚置于含1mg/LL-PPT除草剂的1/2MS培养基上连续培养和筛选，直至转基因植株抗除草剂bar基因纯合，后代不再分离；通过对抗除草剂bar基因纯合的转基因植株的目的基因PCR检测和验证而获得目的基因纯合的转基因植株。其优点在于：节省大量的人力和物力，缩短了转基因小麦纯合所需的时间。

主权项

一种快速获得转基因小麦纯合植株的方法，其特征在于：将含有目的基因的重组质粒导入小麦，通过对转基因小麦的幼胚培养、除草剂筛选以及PCR检测快速获得转基因小麦目的基因纯合植株，具体步骤是：a)以pAHC25为基础质粒，将目的基因插入pAHC25的SmaI和SacI限制性内切酶切位点之间，以目的基因取代pAHC25的gus基因，使目的基因与pAHC25基础质粒中的抗除草剂bar基因紧密连锁；b)将上步骤获得的重组质粒采用基因枪转化方法导入小麦并获得T0代转基因小麦植株；c)取T0代转基因小麦植株开花15天后的幼胚，置于含1mg/L L‑PPT除草剂的 1/2MS培养基上培养，弃去不抗除草剂的幼苗，待幼苗长至6cm左右移栽至盆钵，常规栽培管理至植株开花；d)取开花15天后的幼胚，至少重复一次c步骤，直至后代幼苗不再死亡，该幼苗为抗除草剂bar基因纯合的转基因小麦植株； e)取d步骤获得的抗除草剂bar基因纯合的同源同代植株中的1株转基因小麦叶片DNA进行目的基因PCR检测是否含有目的基因，如含有目的基因，再对与该株同源同代的所有植株叶片DNA进行目的基因的PCR检测以验证目的基因是否纯合，如目的基因纯合，这些植株即为转基因小麦纯合植株。