一种球形芽孢杆菌伴胞晶体蛋白制备方法及其应用

摘要

本发明公开了一种球形芽孢杆菌伴胞晶体蛋白制备方法及其应用，采用野生型的Bacillus sphaericus IAB 872进行培养，通过超声波处理、溶菌酶处理、DTT处理、复方泛影葡胺处理，提高了可溶性晶体蛋白的产量及活性，从而获得尽可能多的、较高功效的可溶性晶体蛋白。形芽孢杆菌伴胞晶体蛋白对人恶性肿瘤细胞具有一定抑制作用，可应用抗肿瘤药物的制备。球形芽孢杆菌伴胞晶体蛋白对人肿瘤细胞增殖的抑制的结果包括：对肿瘤细胞的抑制率、对肿瘤细胞促凋亡的影响，能够影响细胞的G2/M期，使细胞阻滞在G2/M期。

主权项

1.一种球形芽孢杆菌伴胞晶体蛋白制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1）将BacillussphaericusIAB872菌株在LB固体培养基上活化后，接种于LB液体培养基中30℃过夜培养，次日转接入MBS培养基中，震荡培养至芽胞和晶体从母细胞中完全释放；2）收集发酵液，离心，沉淀用NaCl溶液离心洗涤后，用超声波处理悬液使晶体、芽胞、细胞碎片充分分散，然后充分震荡混匀，除去泡沫，离心，取沉淀；3）将沉淀加水制成悬液，加入溶菌酶至终浓度为0.1～0.5mg/ml，37℃处理2～3h，期间轻柔混匀数次，然后离心收集沉淀；4）将沉淀加水制成悬液，加入DTT至其浓度为50～100mM，充分混匀后，于27～30℃静置1h，离心收集沉淀；5）将沉淀在-20℃与室温下冻融一次，加入质量浓度42～44%复方泛影葡胺，充分混匀后离心，收集上清，并将上清在无菌水中透析24～48h；6）将透析后的上清低温真空冷冻条件下制成冻干粉，得到球形芽孢杆菌伴胞晶体蛋白。