一种血浆低丰度蛋白表面增强拉曼光谱的检测方法

摘要

本发明涉一种利用表面增强拉曼光谱检测血浆中低丰度蛋白的方法。取血浆标准样品加入到疏水性聚合物的离心柱中，置于摇床震荡，离心得到低丰度蛋白溶液；与印迹固定化基质、血浆标准样品混合，孵育得到富集血浆低丰度蛋白印迹固定化基质，加冰醋酸再加入SERS活性金属纳米粒子，经孵育制成低丰度蛋白SERS增强基质混合液；取混合液进行SERS检测；采用上述操作，得到所述未知癌症类型的癌症患者的血浆低丰度蛋白表面增强拉曼光谱数据；将该数据与健康人和已知癌症种类的拉曼光谱数据库相对比，判别出未知癌症的种类。本发明具有检测时间短，所需功率低，固定化基质价格低廉，富集过程简单易行，具有良好的经济和社会效益。

主权项

一种血浆低丰度蛋白表面增强拉曼光谱的检测方法，其特征在于：（1）去除血浆高丰度蛋白取疏水性聚合物于套有离心柱的收集管中，加入洗脱液，充分混匀，3000～6000rpm离心1～5 min后，将收集管中的液体倒掉，重复三次得到经洗脱液洗脱的疏水性聚合物；取血浆标准样品，加入1～10倍体积量的洗脱液进行稀释，加入到含有经洗脱液洗脱的疏水性聚合物的离心柱中，利用移液器反复抽吸充分混匀，置于摇床中200～350 rpm震荡10～15 min，2000～5000 rpm离心，去除沉淀物，收集上层的低丰度蛋白溶液；（2）富集血浆低丰度蛋白取印迹固定化基质，与步骤（1）收集到的低丰度蛋白溶液混合，孵育8～15 min，然后将印迹固定化基质转入漂洗液中浸泡10～20 min，取出在室温下吹干备用；（3）低丰度蛋白SERS增强基质混合液的制备将步骤（2）吹干的印迹固定化基质剪碎并收集于离心管中，加入冰醋酸进行溶解，充分搅拌直至完全呈现为透明胶体状态时，加入SERS活性金属纳米粒子，充分搅拌，水浴42～65℃孵育15～30 min，静置分层，直至固相杂质析出，制成低丰度蛋白SERS增强基质混合液；（4）血浆低丰度蛋白SERS光谱检测取低丰度蛋白SERS增强基质混合液2～20 μl进行SERS检测；（5）癌症判别取一种未知癌症类型的患者血浆，采用步骤（1）到（4）的操作，得到所述未知癌症类型的癌症患者的血浆低丰度蛋白表面增强拉曼光谱数据；将该数据与已建立的健康人和已知癌症种类的血浆低丰度蛋白表面增强拉曼光谱数据库相对比，判别出未知癌症的种类。