主权项 |
一种铁皮石斛在非无菌条件下无糖微体繁殖方法,前期的种子无菌萌发、原球茎的繁殖及种苗的诱导和培养直到长成幼苗均为常规的有糖无菌培养,当铁皮石斛幼苗有2张叶以上时即可进行非无菌条件下的无糖微体繁殖阶段;(1)其实施环境是在密闭的各种大小的容器或房间;(2)培养基质采用松树皮,经过天然阳光下晒干,机械打碎成20目粗粉备用,适当添加蛭石、珍珠岩、沙子、塑料泡沫、石棉、纤维素物质,一般添加的比例为0‑50%;(3)培养基液体用1/2MS、MS、N6、CHB、B5,它们中的成分除不加蔗糖、琼脂、维生素,其他的无机物和有机物均要;(4)激素同时加在培养基液体中,包括NAA及6‑BA,NAA的浓度为0.1mg/L‑2mg/L,6‑BA的浓度为0.2mg/L‑2mg/L;(5)配置培养基其固体基质加含上述激素的培养基液体,比例为1:2‑5,以混匀后手抓成团,一压即散,不宜含过多的水份,配置好的培养基备用;(6)装入托盘托盘用消毒剂1/2000高锰酸钾溶液或1/1000的新洁而灭,擦洗消毒完后可装入备用的培养基;(7)非无菌条件的快速繁殖将无菌条件下的培养成的有2张叶以上的幼苗用常水小心洗去培养基后,晾干即可种入已装有培养基的容器内,并将上述种好苗的容器,放置在密封的环境中,并开始通入二氧化碳气体,二氧化碳的浓度为0.1%‑20%,光照开始5天为3000Lux,5‑10天为5000Lux,10天后8000Lux以上,但不超过20000Lux,每天光照12h‑14h,密封环境内的温度20℃‑36℃,相对湿度60%‑90%,在上述条件下培养50‑80天,待苗有5片以上,茎有3mm‑5mm粗即为大苗。 |