表达白喉毒素A片段的慢病毒载体系统及其制备与应用

摘要

本发明公开了一种表达白喉毒素A片段的慢病毒载体系统及其制备与应用，本发明构建的慢病毒载体系统能协同表达双顺反子GFP/RFP和DTA，驱动白喉毒素A片段在肿瘤细胞中高效表达，荧光蛋白的表达可用于验证所表达的DTA的有效性，同时，荧光蛋白的表达还可用于监测慢病毒的包装效果。本发明构建的慢病毒载体系统能抑制肿瘤细胞生长和细胞中蛋白质的合成，尤其对结直肠癌细胞系SW620和乳腺癌细胞系ZR7530有特异杀伤效果，可用于肿瘤基因治疗。

主权项

表达白喉毒素A片段的慢病毒载体系统，其特征在于：将整合酶D64突变为A的PMDL‑D64A、REV、VSVG和表达载体共转入过量表达突变EF‑2的293T细胞，即在宿主细胞中包装获得慢病毒载体系统；所述的表达载体包括pPRIME‑CMV‑GFP‑2A‑DTA‑FF3，pPRIME‑CMV‑RFP‑2A‑DTA‑FF3，pPRIME‑XRCC5p‑GFP‑2A‑DTA‑FF3，pPRIME‑XRCC5p‑RFP‑2A‑DTA‑FF3；所述的慢病毒载体系统是一种组成型和肿瘤细胞特异型启动子驱动的白喉毒素A片段的非整合慢病毒载体系统。