采用MDCK细胞系生产禽流感病毒二价灭活疫苗的方法

摘要

本发明提供一种采用MDCK细胞系生产禽流感病毒（H5亚型+H9亚型）二价灭活疫苗的方法。包括如下步骤：（1）MDCK细胞系的传代与培养；（2）病毒接种与繁殖；（3）病毒液的灭活与收获；（4）配制疫苗。利用MDCK细胞系生产禽流感病毒灭活疫苗具有无外源因子污染，易于规模化生产，能较好的维持病毒抗原稳定等优点，并能缩短疫苗研发周期与生产周期，具备突发疫情中疫苗供应应急的能力。

主权项

采用MDCK细胞系生产禽流感病毒二价灭活疫苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）MDCK细胞系的传代与培养：MDCK细胞系经胰酶‑EDTA消化分散，用细胞生长液稀释成一定浓度后，接种至合适的容器内，待细胞长满后进行传代或接种病毒；（2）病毒接种与繁殖：用病毒生长液分别将H5亚型禽流感病毒和H9亚型禽流感病毒进行适当稀释后，分别接种用PBS清洗的MDCK细胞，待MDCK细胞完全病变后，停止培养；（3）病毒液的灭活与收获：向上述细胞培养液中加入甲醛溶液灭活后，分别收获H5亚型禽流感病毒抗原和H9亚型禽流感病毒抗原；（4）配制疫苗：将H5亚型禽流感病毒抗原和H9亚型禽流感病毒抗原混入吐温‑80后制成水相，与油相一同乳化，分装后制成成品疫苗。