一个海带雌配子体特异性分子标记FSML-1488的染色体定位

摘要

本发明涉及一个海带雌配子体特异性分子标记FSML-1488的染色体定位方法，包括以下步骤：（1）带有目标片段FSML-1488质粒DNA的制备；（2）海带配子体染色体的制备；（3）探针的制备；（4）荧光原位杂交。本发明优点在于：本发明利用各种工具酶，如离析酶、鲍鱼酶、纤维素酶、果胶酶等的优化配合以获得海带孢子体和配子体原生质体的基础上，制备高质量的染色体，突破FISH技术在藻类学研究中的技术“瓶颈”，成功地将一个长为1488bp的海带雌配子体特异性FSML-1488分子标记定位在染色体上。

主权项

一个海带雌配子体特异性分子标记FSML‑1488的染色体定位方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）带有目标片段FSML‑1488质粒DNA的制备：通过CTAB法提取海带配子体DNA后，利用PCR技术扩增到长为1488 bp的雌配子体特异性FSML‑1488的片段，然后TA克隆后转化至大肠杆菌中，最后提取质粒获得目标片段质粒DNA，所述的目标片段FSML‑1488的序列如SEQ ID NO.5所示；（2）海带配子体染色体的制备：利用混合酶液，即纤维素酶、果胶酶、离析酶及鲍鱼酶，处理海带配子体细胞，以DAPI染色，获得分裂相比较好的高质量染色体；（3）探针的制备：对提取的目标片段FSML‑1488质粒DNA利用切口平移法进行绿色生物素标记探针；（4）荧光原位杂交：按照荧光原位杂交的常规方法进行雌配子体特异性FSML‑1488分子标记的染色体定位。