通过MDA-PCR富集基因组重排免疫球蛋白基因及生产抗体的方法

摘要

本发明提供了一种特异地扩增基因组的重排免疫球蛋白基因的方法，包括：裂解成熟的B细胞；用多重置换扩增的方法，通过能够特异地扩增抗体重链和/或轻链的可变区的引物扩增所述B细胞的基因组基因，从而相对特异地从基因组扩增包含重链和/或轻链的可变区的序列；以所述多重置换扩增所得的反应液为底物，用特异地结合所述抗体重链和/或轻链的可变区的引物进行PCR扩增，以获得所述抗体重链或轻链的可变区的基因序列；对所得到的PCR产物测序，以确定PCR扩增得到所述抗体重链或轻链的可变区的基因序列。通过本发明的方法获取重排的免疫球蛋白基因并利用该基因生产抗体。

主权项

一种特异地扩增基因组的重排免疫球蛋白基因的方法，包括：裂解成熟的B细胞；用多重置换扩增的方法，通过能够特异地扩增抗体重链和/或轻链的可变区的引物扩增所述B细胞的基因组基因，从而相对特异地从基因组扩增包含重链和/或轻链的可变区的序列；以所述多重置换扩增所得的反应液为底物，用特异地结合所述抗体重链和/或轻链的可变区的引物进行PCR扩增，以获得所述抗体重链或轻链的可变区的基因序列；对所得到的PCR产物测序，以确定PCR扩增得到所述抗体重链或轻链的可变区的基因序列；其中在所述多重置换扩增方法中使用的针对小鼠IgG重链的引物其序列为如在表2中列出的mCH1‑1、mCH1‑2、mCH1‑3、mCH1‑4、mCH1‑5、mCH1‑6、mCH1‑7、mCH1‑8、mCH1‑9、mCH1‑10、mCH1‑11和mCH1‑12序列；其中在所述多重置换扩增方法中使用的针对小鼠κ轻链的引物其序列为如在表2中列出的mCK1、mCK2、mCK3、mCK4、mCK5、mCK6、mCK7、mCK8、mCK9、mCK10、mCK11和mCK12序列；其中在所述多重置换扩增方法中使用的针对小鼠λ轻链的引物其序列为如在表2中列出的mCL1、mCL2、mCL3、mCL4、mCL5、mCL6、mCL7、mCL8、mCL9、mCL10、mCL11和mCL12序列。