一种分离冈崎片段的方法

摘要

本发明公开了一种分离冈崎片段的方法，通过氯化铯提取基因组DNA和蔗糖梯度离心以及核酸外切酶降解等主要步骤，分离获得高质量的冈崎片段。本发明的冈崎片段的分离方法，操作容易，质控严格，获得的产物纯度高，污染少，适用于各种培养的酵母细胞。

主权项

一种用于提取酵母冈崎片段的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(a)提供一含酵母细胞DNA的样品；(b)对所述的含酵母细胞DNA的样品，采用氯化铯提取法进行分离纯化，从而得到含酵母细胞DNA的第一纯化产物；(c)在所述的第一纯化产物中加入(i)一单链DNA序列和(ii)一5′端带有RNA引物的单链DNA序列作为参照序列，形成第一混合物；(d)对所述第一混合物，采用蔗糖梯度离心进行分离，从而得到长度在500nt以内的DNA物质的第二纯化产物；(e)对所述的第二纯化产物，进行磷酸化处理，然后采用RNA核酸酶进行酶切处理，再用核酸外切酶进行酶切处理，从而形成酶切混合物，其中所述酶切混合物中残留的未被酶解的核酸序列即为冈崎片段；(f)任选地从所述酶切混合物中分离所述的冈崎片段，其中，在步骤(c)中，所述单链DNA序列的加入量为20‑100ng；所述5′端带有RNA引物的单链DNA序列的加入量为20‑100ng。