| 摘要 |
Przedmiotem wynalazku jest test diagnostyczny na bazie amino modyfikowanego nanozlota sprzezonego z karboksy modyfikowanymi nukleotydami do identyfikacji lekoopornosci Staphylococcus Aureus, który sklada sie z membrany nitrocelulozowej typu Lateral Flow o natezeniu przeplywu analitu od 135 do 240 sekund/cm nasaczonej punktowo roztworem bialka wiazacego biotyne w ilosci od 0,005 mg/mm2 do 0,1 mg/mm2 zawieszonego w 10% roztworze wodnego etanolu oraz reagenta detekcyjnego zawierajacego 25 ?g amino modyfikowanych nanoczastek Au sprzeganych kowalencyjnie z równomolowa mieszanina dwóch sond hybrydyzacyjnych o wzorze 1 lub 2 modyfikowanych lacznikiem karboksylowym w ilosci 1-10 nmoli z 1-10 pmolami równomolowej mieszaniny dwóch sond hybrydyzacyjnych o wzorze odpowiednio 2 lub 1 znakowanych biotyna. Sposób wytwarzania testu diagnostycznego na bazie amino modyfikowanego nanozlota sprzezonego z karboksy modyfikowanymi nukleotydami do identyfikacji lekoopornosci Staphylococcus Aureus polega na tym, ze w pierwszym etapie membrane nitrocelulozowa typu Lateral Flow o natezeniu przeplywu analitu od 135 do 240 sekund/cm nasacza sie punktowo roztworem bialka wiazacego biotyne w ilosci od 0,005 mg/mm2 do 0,1 mg/mm2 zawieszonego w 10% roztworze wodnego etanolu, w drugim etapie prowadzi sie inkubacje modyfikowanych lacznikiem aminowym nanoczastek zlota o stezeniu 25 ?g/ml z równomolowa mieszanina dwóch sond hybrydyzacyjnych o wzorze 1 lub 2 z wolna grupa karboksylowa zawierajaca od 1 do 10 nmoli oligonukleotydu, po zakonczeniu sprzegania powstale nanoczastki Au poddaje sie koncentracji w procesie wirowania 14400 x g przez 30 minut, odrzuca sie supernatant a osad zawiesza sie w 100 ?l-200 ?l dejonizowanej wody destylowanej, nastepnie roztwór ponownie poddaje sie koncentracji, osad nanoczastek Au zawiesza sie w 39-109 ?l dejonizowanej wody destylowanej i dodaje sie 1 ?l biotynylowanej równomolowej mieszaniny dwóch sond hybrydyzacyjnych o wzorze odpowiednio 2 lub 1 zawierajacych 1-10 pmoli oligonukleotydu, po czym w trzecim etapie do 10-30 ?l reagenta detekcyjnego dodaje sie 10 ?l gestej hodowli bakteryjnej, mieszanine reakcyjna umieszcza sie w lazni wodnej w temperaturze 90-100°C w czasie 3-5 min, nastepnie pozostawia sie do ostygniecia do temperatury pokojowej i 10-20 ?l mieszaniny reakcyjnej przenosi sie na membrane z immobilizowanym bialkiem wiazacym biotyne. |
