氯霉素免疫原、包被原及其在胶体金试纸中的应用

摘要

本发明涉及氯霉素免疫原、包被原及其在胶体金试纸中的应用，属于免疫学技术领域。该免疫原、包被原为氯霉素通过高锰酸钾氧化后所得的半抗原偶联载体蛋白的产物。此半抗原在分子结构，立体化学和电子分布上与氯霉素对应体相似。半抗原分子具有便于与蛋白载体偶联的活性基团，且活性基团的存在对待测物分子的电子分布没有影响。此半抗原偶连学蓝蛋白后能使机体产生效价高，特异性好的针对氯霉素的抗体，吸附于玻璃纤维素膜上；偶连人血清蛋白后构建的包被原可被吸附于硝酸纤维素膜上，用于构建氯霉素胶体金试纸。

主权项

1.一种氯霉素免疫原、包被原的制备方法，其特征在于，使用氯霉素半抗原和蛋白进行交联制备所述氯霉素免疫原、包被原，所述的氯霉素半抗原为式(I)所示结构，所述的免疫原为氯霉素半抗原和血蓝蛋白偶联的产物，为式(II)所示结构，所述的包被原为氯霉素半抗原和人血清蛋白偶联后的产物，为式(III)所示结构，所述免疫原的制备方法包括以下步骤：(1)氯霉素半抗原的合成；(2)氯霉素半抗原活泼酯的合成；(3)氯霉素半抗原活泼酯与血蓝蛋白进行偶联；(4)免疫原的纯化；(5)免疫原蛋白浓度的确定，分装；所述包被原的制备方法包括以下步骤：(1)氯霉素半抗原的合成；(2)氯霉素半抗原活泼酯的合成；(3)氯霉素半抗原活泼酯与人血清蛋白进行偶联；(4)包被原的纯化；(5)包被原蛋白浓度的确定，分装；所述氯霉素半抗原的合成方法如下：(1)称取氯霉素1mmol，高锰酸钾10mmol与20mL蒸馏水中回流反应48h；(2)冷却反应体系至室温，旋转蒸发多余水份，加入10mL乙酸乙酯，过滤取滤液，加入20mL饱和碳酸氢钠溶液，充分震荡，弃去乙酸乙酯层；(3)调节水相至中性，使用60mL乙酸乙酯分三次萃取，蒸干有机溶剂，得黄色粉末状固体；(4)使用上述制备的黄色固体0.1g，溶于2mLDMF中，搅拌加入60mg DCC和40mgNHS，反应24h后加入0.2g4-氨基丁酸，继续反应48h；(5)过滤保留滤液，使用硅胶柱分离得目标氯霉素半抗原。