发明名称 |
一种鉴别鸭骨骼肌中肌纤维类型的方法 |
摘要 |
本发明公开了一种鉴别鸭骨骼肌中肌纤维类型的方法,包括如下步骤,(1)制作切片:将鸭的骨骼肌肉利用液氮-异戊烷体系冷却,采用冷冻切片法制作出切片;(2)漂洗切片:将(1)步制作好的切片置于载玻片上,在室温条件下,自然晾干至切片发白,利用Tris洗液漂洗两次,每次漂洗1min;(3)切片的第一次孵育处理;(4)切片的第二次孵育处理;(5)切片的染色处理;(6)经上步染色处理后的切片用照相显微镜观察并拍照,利用ImagePro-plus6.0软件测得的不同光密度值即可判定鸭骨骼肌中肌纤维的类型。本发明的优点,经过本发明方法处理的肌纤维颜色深浅明显、清晰、辨识度高,节省试验成本。 |
申请公布号 |
CN103512885A |
申请公布日期 |
2014.01.15 |
申请号 |
CN201310472219.7 |
申请日期 |
2013.10.11 |
申请人 |
江苏省家禽科学研究所;江苏腾达源农牧有限公司 |
发明人 |
李慧芳;束婧婷;朱文奇;单艳菊;宋卫涛;徐文娟;胡艳;朱春红;陶志云;宋迟;章双杰;章明;刘宏祥;姬改革 |
分类号 |
G01N21/84(2006.01)I;G01N1/28(2006.01)I |
主分类号 |
G01N21/84(2006.01)I |
代理机构 |
北京东正专利代理事务所(普通合伙) 11312 |
代理人 |
蔡仲德 |
主权项 |
一种鉴别鸭骨骼肌中肌纤维类型的方法,其特征在于,该方法包括如下步骤,(1)制作切片:将鸭的骨骼肌肉利用液氮‑异戊烷体系冷却,采用冷冻切片法制作出切片;(2)漂洗切片:将(1)步制作好的切片置于载玻片上,在室温条件下,自然晾干至切片发白,利用Tris洗液漂洗两次,每次漂洗1min;(3)切片的第一次孵育处理:经(2)步处理的切片置入碱性预孵育液中,在20~30℃条件下孵育15min,碱性预孵育液的成份包括氯化钙、甘氨酸、甲醛、氢氧化钠;(4)切片的第二次孵育处理:经(3)步处理的切片利用Tris洗液漂洗后,在滤纸上将切片上的液体吸干,置入ATP孵育液中,在温度为37℃的培养箱中孵育60min,ATP孵育液的成份包括甘氨酸‑氢氧化钠缓冲液、氯化钙、ATP;(5)切片的染色处理:①经上步处理的切片用质量浓度为13.3g/L氯化钙溶液洗涤4次,每次1~2min;②将切片用滤纸吸干后浸渍在质量百分浓度为2%的氯化钴溶液中3min;③用纯水冲洗切片4次,每次1~2min;④再将切片浸渍在质量百分浓度为2%的硫化铵溶液中3~4min;⑤用流水冲洗切片3min后,纯水再清洗一次;⑥最后依次用体积百分浓度为50%、70%、96%、100%的乙醇溶液将切片脱水,用二甲苯透明后中性树胶封片; (6)经上步染色处理后的切片用照相显微镜观察并拍照,利用Image Pro‑plus 6.0软件测得的不同光密度值即可判定鸭骨骼肌中肌纤维的类型。 |
地址 |
225125 江苏省扬州市邗江区仓颉路58号 |