一种银杏内酯注射液的高效液相色谱检测方法

摘要

本发明涉及一种注射剂的高效液相色谱检测方法，特别涉及银杏内酯注射液的高效液相色谱检测方法。本发明提供了一种采用高效液相色谱法控制银杏内酯注射剂质量的方法，该方法可以采用含量测定或游离银杏内酯限量检查或色谱指纹图谱三种方法中的任意一种或几种来控制银杏内酯注射液的质量。本发明提供的高效液相色谱检测方法具有良好的精密度、稳定性和重复性，能够更全面、有效地达到控制银杏内酯注射液质量的目的。

主权项

一种银杏内酯注射液的高效液相色谱检测方法，该方法由含量测定、游离银杏内酯限量检查、指纹图谱测定三种方法组成，其特征在于采用如下的含量测定与指纹图谱测定两种方法联合进行检测，或游离银杏内酯限量检查与指纹图谱测定两种方法联合进行检测，或含量测定、游离银杏内酯限量检查与指纹图谱测定三种方法联合进行检测：(1)含量测定①色谱条件为：色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，柱温为30℃，流动相为异丙醇‑甲醇‑水比例为7∶21∶72，流速：1ml/min，检测器为可变波长紫外检测器，检测波长为220nm，理论塔板数按银杏内酯B计应不低于7000；②对照品溶液的制备方法为：分别精密称取经105℃干燥至恒重的银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯K对照品适量，分别加50％丙酮溶解，制成1ml分别含0.5mg银杏内酯A、0.5mg银杏内酯B、0.1mg银杏内酯K的溶液，即得对照品溶液；③供试品溶液的制备方法为：精密量取银杏内酯注射液2ml置10ml量瓶中，加入6mol/L的盐酸溶液2ml，室温放置3.5小时使有结晶析出，加丙酮使溶解并稀释至刻度，摇匀，放置30分钟，经微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；④测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，测定；⑤测定结果：银杏内酯注射剂每毫升含银杏内酯A为1.0mg～2.0mg、银杏内酯B为2.2mg～3.2mg、银杏内酯K为0.1mg～0.2mg；含银杏内酯以银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯K的总量计，应为4.1mg～4.9mg。(2)游离银杏内酯限量检查①色谱条件为：色谱柱：Thermo Hypersil ODS，5μm，4.6mm×250mm；柱温为20℃～40℃，流动相为四氢呋喃‑甲醇‑水比例为5～15∶20～30∶50～80，流速为0.5ml/min～1.5ml/min，检测器为紫外检测器，检测波长为210nm～230nm，理论塔板数按银杏内酯B计不低于2000；②对照品溶液的制备方法为：取银杏内酯A、银杏内酯B对照品，分别加甲醇溶解制成1ml含0.2mg～0.8mg的溶液，即得对照品溶液；③供试品溶液的制备方法为：取银杏内酯注射液15ml～35ml，加乙酸乙酯振摇提取2次～6次，每次加乙酸乙酯15ml～25ml，合并乙酸乙酯液，加1g～5g无水硫酸钠脱水后水浴挥干，残渣加2ml～8ml甲醇使溶解，作为供试品溶液；④测定：分别量取等量的对照品溶液与供试品溶液各5μl～50μl， 注入液相色谱仪，测定对照品与供试品色谱峰吸收度积分值；⑤测定结果：色谱图中供试品溶液的银杏内酯A、银杏内酯B的吸收度积分值不得大于对照品溶液的银杏内酯A、银杏内酯B的吸收度积分值；(3)指纹图谱测定①色谱条件为：高效液相色谱系统：waters2695液相色谱仪；色谱柱：Thermo Hypersil ODS，5μm，4.6mm×250mm；柱温：30℃；流动相为甲醇‑异丙醇‑50mmol/L乙酸铵水溶液，加乙酸调PH值为6.5，比例为7.5∶2.5∶90；流速：1.0ml/min；检测器：waters2420蒸发光散射检测器；蒸发光散射检测器参数：N2:25Psi；喷雾器温度：37℃；漂移管温度：50℃，理论塔板数按银杏内酯B计应不低于3000；②对照品溶液的制备：取银杏内酯B对照品，加5％葡甲胺水溶液70℃加热使溶解，制成每1mL含0.510mg的溶液，即得；③供试品溶液的制备：取银杏内酯注射液作为供试品溶液；④测定：分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定并记录40分钟色谱图；⑤测定结果：供试品指纹图谱中与参照物峰相应的峰为S峰，计算相对保留时间与峰面积比值，指纹图谱中有4个共有峰；相对保留时间：S号峰为1.00，1号峰为1.10，2号峰为1.98，3号峰为2.34；或者，①色谱条件为：高效液相色谱系统：waters2695液相色谱仪；色谱柱：Thermo Hypersil ODS，5μm，4.6mm×250mm；柱温：20℃；流动相：甲醇‑异丙醇‑50mmol/L乙酸铵水溶液，加乙酸调PH值为6.0，比例为6.0∶4.0∶100.0；流速：0.5ml/min；检测器：waters2420蒸发光散射检测器；蒸发光散射检测器参数：N2：25Psi；喷雾器温度：35℃；漂移管温度：45℃，理论塔板数按银杏内酯B计应不低于3000；②对照品溶液的制备：取银杏内酯B对照品，加5％葡甲胺水溶液70℃加热使溶解，制成每1mL含0.492mg的溶液，即得；③供试品溶液的制备：取银杏内酯注射液作为供试品溶液；④测定：分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各3μl，注入液相色谱仪，测定并记录25分钟色谱图；⑤测定结果：供试品指纹图谱中与参照物峰相应的峰为S峰，计算相对保留时间与峰面积比值，指纹图谱中有4个共有峰，相对保留时间：S号峰为1.00，1号峰为0.72，2号峰为1.84，3号峰为2.06；或者，①色谱条件为：高效液相色谱系统：waters2695液相色谱仪；；色谱柱：Thermo Hypersil ODS，5μm，4.6mm×250mm；柱温：40℃； 流动相：甲醇‑异丙醇‑50mmol/L乙酸铵水溶液，加乙酸调PH值为7.0，比例为9.0∶2.0∶75.0；流速：1.5ml/min；检测器：waters2420蒸发光散射检测器；蒸发光散射检测器参数：N2：25Psi；喷雾器温度：40℃；漂移管温度：55℃，理论塔板数按银杏内酯B计应不低于3000；②对照品溶液的制备：取银杏内酯B对照品，加5％葡甲胺水溶液70℃加热使溶解，制成每1mL含0.515mg的溶液，即得；③供试品溶液的制备：取银杏内酯注射液作为供试品溶液；④测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定并记录55分钟色谱图；⑤测定结果：供试品指纹图谱中与对照品溶液峰相应的峰为S峰，计算相对保留时间与峰面积比值，指纹图谱中有4个共有峰，相对保留时间：S号峰为1.00，1号峰为1.38，2号峰为2.42，3号峰为2.86。