一种人参高效组织培养和再生的方法

摘要

本发明为生物技术，特别是涉及一种使人参经过长时间多次继代培养后仍能保持分化再生能力技术的方法。是以人参的特定组织为外植体，其中特别以茎节为外植体产生的愈伤组织效率最高，在经过优化的以MS培养基为主的培养体系中，经过诱导产生愈伤组织，这种愈伤组织可以在继代培养基上长期旺盛生长，继代。这种愈伤组织大量产生可供制药使用的多种人参次生代谢产物——人参皂甙、甾醇、多糖等。而且经过长期继代培养之后的愈伤组织，在转换培养条件为再生培养基时，仍能保持高效率的芽和根再生能力，并产生大量完整再生植株，可以在到土壤中继续栽种。

主权项

1.一种人参高效组织培养和再生的方法，其特征是具体步骤如下：1)愈伤组织的诱导及继代：取人参的茎节，在超净台中用锋利刀片切成3-5毫米大小的组织块，放入三角瓶中，用70%酒精浸泡、0.1%升汞灭菌，然后用无菌蒸馏水彻底漂洗5-6遍，将组织块转移到盛有愈伤组织诱导培养基的三角瓶中，置于25℃培养箱中暗培养，每3周进行一次继代培养，在超净台中生长旺盛的愈伤组织从原瓶中转移到有新鲜继代培养基的三角瓶中，然后继续25℃暗培养，所用的愈伤组织诱导培养基为：MS基本培养基+CH5-500mg/L+2,4-D0.1-20mg/L+6-BA0.1-5mg/L+NAA0.1-5mg/L，所用的继代培养基为：MS基本培养基+CH5-500mg/L+2,4-D0.1-10mg/L+6-BA0.1-5mg/L+NAA0.1-5mg/L+KT0.1-1mg/L；2)植株再生：在愈伤组织继代培养2次之后，取愈伤组织进行分化，在超净台中将愈伤组织块从继代培养基上取出，转移到含有分化培养基即芽再生培养基的三角瓶中，在培养箱中25℃光培养，即光周期16小时光照+8小时黑暗，光照强度为3000Lux，10天以后，可见愈伤组织部分突起处出现绿色芽点，2-3周后变成幼芽，将幼芽在无菌条件下转移到含有生根培养基的三角瓶中，继续光培养，7天后可见幼苗的基部与培养基交接处出现根组织，再过约30天的生根培养，即可长成根长度1厘米以上的完整再生植株，分化培养基为：1/4MS基本培养基+CH5-500mg/L+NAA0.5-10mg/L+6-BA0.1-5mg/L+KT0.1-1mg/L；所述MS基本培养基成分为：大量元素使用浓度 (mg/L)硝酸钾　KNO31900硝酸铵　NH4NO31650磷酸二氢钾　KH2PO4170硫酸镁　MgSO4·7H2O370氯化钙　CaCl2·2H2O440微量元素碘化钾　KI0.83硼酸　H3BO36.2硫酸锰　MnSO4·4H2O22.3硫酸锌　ZnSO4·7H2O8.6钼酸钠　Na2MoO4·2H2O0.25硫酸铜　CuSO4·5H2O0.025氯化钴　CoCl2·6H2O0.025铁盐乙二胺四乙酸二钠　Na2·EDTA37.25硫酸亚铁　FeSO4·7H2O27.85有机成分肌醇100甘氨酸2盐酸硫胺素　VB10.1盐酸吡哆醇　VB60.5烟酸　VB5 或 VPP0.5蔗糖　sucrose30g/L琼脂　agar8g/L3)炼苗及移栽：打开三角瓶的封口膜，将三角瓶连同里面的幼苗在培养箱中放置3天，然后将它们放入即将栽种幼苗的温室中3天炼苗，将幼苗完整地从培养基中取出，小心地除去附着在上面的愈伤组织和培养基碎块，并用蒸馏水反复冲洗干净，然后将幼苗栽入灭菌营养土中，保持环境湿度和洁净度，2-3周后幼苗即可成活。