利用RT-LAMP快速检测甘蔗黄叶病毒的方法

摘要

利用RT-LAMP快速检测甘蔗黄叶病毒的方法，根据甘蔗黄叶病毒的保守序列设计RT-LAMP检测的特异性引物共2对：一对外引物F3、B3和内引物FIP、BIP，在61-63℃条件下恒温反应60-80min，利用电泳或者荧光染料的方法检测甘蔗黄叶病毒。采用本发明既能保证检测的灵敏性和特异性，同时又简化了操作，并且也节省了成本，为甘蔗黄叶病毒的检测提供了一种快速、简便、有效的方法。

主权项

利用RT‑LAMP快速检测甘蔗黄叶病毒的方法，其特征在于，包括如下步骤：1）根据NCBI已报道的甘蔗黄叶病毒的CP蛋白的核苷酸序列，通过多序列比对选择相对保守序列，通过在线LAMP引物设计软件primerExplorer V4设计4条引物，其中包括2条外引物F3/B3和2条内引物FIP/BIP；2)利用RNAiso Plus法提取甘蔗植株的总RNA；3）利用M‑MLV反转录酶把提取的RNA转化为cDNA；4)设置不同的Mg2+浓度、dNTPs的浓度以及甜菜碱的浓度，确定最佳反应体系；分别改变反应的温度进行RT‑LAMP扩增反应，RT‑LAMP反应温度为61‑63℃，反应时间为60‑80min；5）在最佳反应参数的条件下，以未感染样品作为阴性对照验证这一方法的特异性；6）实验结果通过肉眼判断和利用1.5%的电泳检测进行验证或者荧光染料检测可以检测出甘蔗黄叶病毒。