发明名称 |
枣疯病植原体环介导等温扩增快速检测方法 |
摘要 |
本发明公开了一种枣疯病植原体环介导等温扩增快速检测方法,本发明针对枣疯病植原体16S rDNA基因保守序列的6个区域设计4条特异引物,利用一种链置换DNA聚合酶在等温62℃左右,几十分钟即可实现核酸的高效扩增;4条引物对靶序列的6个特异序列区域的识别,保证了LAMP扩增的高度特异性;LAMP不需要模板的热变性,长时间温度循环,在等温条件下扩增,不会因温度改变而造成时间的浪费,使反应速度可提高30-50%;反应结束后,可直接通过肉眼观察反应管颜色变化,或通过凝胶电泳判断检测结果;该技术对枣疯病植原体的检测特异性强,具有快速、高效、仪器要求简易,操作简便,成本低,易于在基层推广使用的特点。 |
申请公布号 |
CN103497998A |
申请公布日期 |
2014.01.08 |
申请号 |
CN201310455621.4 |
申请日期 |
2013.09.30 |
申请人 |
新疆农业大学 |
发明人 |
韩剑;罗明;张祥林;何贵伦;殷智婷 |
分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I;C12Q1/04(2006.01)I |
主分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I |
代理机构 |
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代理人 |
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主权项 |
一种枣疯病植原体环介导等温扩增检测方法,其特征在于它的方法包括以下两部分:(1)提供两对用于检测枣疯病植原体的LAMP引物序列,即长度分别为22bp、21bp、50bp和53bp的寡聚核苷酸序列,依次命名为F3、B3、FIP和BIP,上述两对LAMP引物的寡聚核苷酸序列如下:F3:5’‑GTCTGCAACTCGACTTCATGAA‑3’B3:5’‑TAACCCCAATCATCAACCCTA‑3’FIP:5’‑GGTGTGTACAAACCCCGAGAACGTTTTGGAATCGCTAGTAATCGCGAATC‑3’BIP:5’‑AAACCACGAAAGTTAGCAATACCCGTTTTCCTTAGACAGCTCCCTCTTCTTGC‑3’(2)提供一种枣疯病植原体的LAMP检测方法,即首先从待测样品中制备反应模板,并配置LAMP反应体系,然后通过LAMP反应程序对反应模板进行扩增,最后根据反应混合物的颜色显示或通过琼脂糖凝胶电泳检测,判断检测结果。 |
地址 |
830052 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市农大东路311号 |