一种快速测定曲或酒醅或发酵醪中氨基甲酸乙酯的方法

摘要

本发明公开了一种快速测定固态发酵物（曲或者酒醅或发酵醪）中氨基甲酸乙酯EC的方法，采用超声萃取，顶空-固相微萃取技术富集固态发酵物中的氨基甲酸乙酯，无需繁琐的预处理过程及有机溶剂，再用气相色谱-质谱联用技术进行定量检测，对照标准曲线计算固态发酵物中的EC含量。本发明建立的方法能够快速检测并定量固态发酵物中的氨基甲酸乙酯，检测限低至1.16μg/L，线性相关系数大于0.99，回收率为77%-119%，相对标准偏差0.91%-13.63%。本方法采用以往白酒酒曲和酒醅的常用处理方法——超声萃取，结合先进的定量检测技术HS-SPME，用于固态发酵物中氨基甲酸乙酯的定量检测分析。

主权项

一种快速测定固态发酵物曲、酒醅或发酵醪中氨基甲酸乙酯EC的方法，其特征在于对固态发酵物进行超声萃取，离心取上清液置于顶空瓶中，加入内标溶液氨基甲酸丙酯PC，再加入氯化钠饱和，旋紧瓶盖，插入萃取头搅拌吸附，萃取富集EC，再用气相色谱‑质谱联用技术进行定量分析；步骤为：（1）超声萃取：取10 g固态发酵物，加入20 mL实验专用水，浸泡30 min，超声萃取30 min，离心取上清；所述实验专用水为超纯水煮沸5‑10min冷却；（2）顶空固相微萃取：吸取上述超声萃取后上清液8 mL置于20 mL的顶空瓶中，加入5 μL乙醇配制的内标溶液PC，加入3 g氯化钠，旋紧瓶盖，插入萃取头，在50‑70℃下250 rpm恒温搅拌萃取30‑60 min；（3）气相色谱‑质谱联用检测：萃取完毕后将萃取头取出，插入气相色谱进样口250℃热解吸5 min，毛细管柱为DB‑WAX或HP‑5，载气为He，流速2 mL/min；不分流进样；程序升温：50℃恒温2 min，以5℃/min的速度升温至170℃，再以10℃/min的速度升温至230℃，保持5 min；MS条件为EI电离源，电子能量70 eV，离子源温度230 °C，扫描范围35.00~350.00 amu，SIM模式特征离子62；通过将样品和标准品的保留时间对比来确认目标物EC以及内标物PC峰；DB‑WAX毛细管柱为：60或30 m×0.25 mm i.d.×0.25 μm；HP‑5毛细管柱为：60或30m×0.25 mm i.d.×0.25 μm；（4）标准曲线的建立：制作标准曲线所用的一系列EC浓度的溶液，先用EC标准品和色谱纯无水乙醇配制而成的高浓度EC溶液作为储藏液，其他浓度梯度EC溶液均用储藏液逐步稀释所得；将上述稀释后的EC溶液加入到实验专用水中，加入内标溶液PC，顶空固相微萃取富集，最后进行GC‑MS定量检测，以EC与PC峰面积之比为横坐标，EC与PC的浓度比为纵坐标，绘制标准曲线；（5）酒曲、酒醅或发酵醪样品测定：对样品采用浸泡、超声萃取预处理，离心后取上清液，然后用顶空固相微萃取技术富集上清液中的EC，再用气相色谱‑质谱联用进行定性定量分析，根据样品中EC/PC的面积比，对照标准曲线计算样品中EC的含量。