牛呼吸道疾病综合征多重PCR检测试剂盒及其制备方法

摘要

牛呼吸道疾病综合征多重PCR检测试剂盒及其制备方法，涉及牛呼吸道疾病主要病毒检测领域，解决了检测牛呼吸道疾病综合征多联PCR方法存在无法同时有效检测牛呼吸道疾病综合征的四种病原的问题。该试剂盒包括MightyAmp DNA聚合酶，2xBuffe Mix缓冲液，无菌双蒸水，分别鉴定牛传染性鼻气管炎病毒、牛呼吸道合胞体病毒、牛病毒性腹泻病毒以及牛副流感3型病毒的四对特异性引物，还包括上述四种病毒的阳性对照质粒。本发明可在同一反应体系中同时检测是否含有上述四种病毒的核酸，特异性和敏感性较高，可对牛群中隐形感染或持续带毒宿主和发病动物进行准确检测，无感染性，安全性高，可在短时间检测出结果，省时省力。

主权项

牛呼吸道疾病综合征多重PCR检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：MightyAmp DNA聚合酶、2xBuffe Mix缓冲液、无菌双蒸水、四对特异性引物和四个阳性对照质粒；所述四对特异性引物分别为：鉴定牛传染性鼻气管炎病毒的引物P1和P2，鉴定牛呼吸道合胞体病毒的引物P3和P4，鉴定牛病毒性腹泻病毒的引物P5和P6，鉴定牛副流感3型病毒的引物P7和P8：P1：5'‑GCTCGCCAACTTCTTTCAGGG‑3'，P2：5'‑GCGTCAAACTCCTCCTCTTCCTC‑3'，P3：5'‑TATGCTATGTCCCGATTGG‑3'，P4：5'‑ACTGATTTGGCTAGTACACCC‑3'，P5：5'‑GGTAGCAACAGTGGTGAGTTC‑3'，P6：5'‑CTCAGGTTAAGATGTGCTGTG‑3'，P7：5'‑GCTCTTCTCTTTTTGTCCCATTCTT‑3'，P8：5'‑AACCCCTTCCTCAATCCTGATATAC‑3'；所述四个阳性对照质粒分别为：牛传染性鼻气管炎病毒阳性对照质粒、牛呼吸道合胞体病毒阳性对照质粒、牛病毒性腹泻病毒阳性对照质粒和牛副流感3型病毒阳性对照质粒；所述牛传染性鼻气管炎病毒阳性对照质粒为含有306个碱基的核苷酸片段构成的pMD18‑T重组质粒，所述牛呼吸道合胞体病毒阳性对照质粒为含有600个碱基的核苷酸片段构成的pMD18‑T重组质粒，所述牛病毒性腹泻病毒阳性对照质粒为含有130个碱基的核苷酸片段构成的pMD18‑T重组质粒，所述牛副流感3型病毒阳性对照质粒为含有425个碱基的核苷酸片段构成的pMD18‑T重组质粒；所述含有306个碱基的核苷酸片段构成的pMD18‑T重组质粒、含有600个碱基的核苷酸片段构成的pMD18‑T重组质粒、含有130个碱基的核苷酸片段构成的pMD18‑T重组质粒和含有425个碱基的核苷酸片段构成的pMD18‑T重组质粒均能在大肠杆菌DH5α感受态细胞中增殖。