主权项 |
一种芒属植物芒荻杂种9号体胚组培快速繁殖方法,其步骤是:A、幼穗选取:选取芒荻杂种9号处于颖花原基形成期的幼穗;B、用初代诱导培养基诱导:将其剪成2‑3厘米小段,先用75%体积比酒精消毒25‑35s,然后用0.1%质量体积比的氯化汞浸泡3‑5min,再用无菌水冲洗2‑4次,将其接种在幼穗的初代诱导培养基上,经过28‑30天的初代诱导,获得胚性愈伤,培养条件为24‑28℃,暗培养,初代诱导培养基为:A:MS培养基附加激动素KT1‑2mg/L,2,4二氯苯氧乙酸2,4‑D3‑5mg/L,蔗糖30g/L,PhytagelR3g/L,或B:MS培养基附加激动素KT3‑4mg/L,2,4二氯苯氧乙酸2,4‑D1‑3mg/L,六水氯化镁MgCl2·6H2O800mg/L,蔗糖30g/L,PhytagelR3g/L;C、用生苗培养基继代培养:所获得的胚性愈伤在生苗培养基上继代生苗,25‑30天继代一次,增殖系数为3‑4,培养条件为24‑28℃,每天光照14‑16个小时,光强为2000LX,所述的生苗培养基配方为:MS培养基附加6‑苄氨基腺嘌呤6‑BA1‑2mg/L,2,4二氯苯氧乙酸2,4‑D1‑2mg/L,六水氯化镁MgCl2·6H2O800mg/L,蔗糖30g/L,PhytagelR3g/L,将胚性愈伤转到生苗培养基之后4‑6天,愈伤开始转绿,8‑12天开始分化出芽,15‑20天形成小幼苗;D、用生根诱导培养基诱导生根:所生幼苗在生根诱导培养基上诱导生根,培养25‑30天,培养条件为24‑28℃,每天光照14‑16个小时,光强为2000LX,生根诱导培养基为:1/2MS培养基附加2,4二氯苯氧乙酸2,4‑D0.5‑2mg/L,蔗糖30g/L,PhytagelR3g/L,将长到5‑10厘米的幼苗转到生根诱导培养基上,5天幼苗就会分化出白色或黄色的根;E、驯化移栽:在温室内,将生长健壮的、株高在5‑6厘米的组培苗移栽到由沙土组成的驯化苗圃中驯化,每天定期给幼苗喷施驯化培养液和清水,15‑20d后,视幼苗长势,移栽到苗圃中,温室条件为15℃‑25℃,照明使用卤光,光照14‑16个小时,光照强度为2000LX,获得了芒荻杂种9号的幼苗。 |