发明名称 | 一种分离培养家禽内皮祖细胞的方法 | ||
摘要 | 本发明公开了一种分离培养家禽内皮祖细胞的方法,其特征在于包括以下步骤:采集外周血、分离收集得到单个核细胞、加入培养液进行细胞培养、用贴壁细胞和非贴壁细胞的混合物进行培养。根据本发明家禽内皮祖细胞的分离培养方法,可从家禽外周血中分离培养出大量EPCs。 | ||
申请公布号 | CN103484423A | 申请公布日期 | 2014.01.01 |
申请号 | CN201310308919.2 | 申请日期 | 2013.07.18 |
申请人 | 浙江大学 | 发明人 | 谭勋;毕师诚 |
分类号 | C12N5/071(2010.01)I | 主分类号 | C12N5/071(2010.01)I |
代理机构 | 浙江杭州金通专利事务所有限公司 33100 | 代理人 | 黎双华 |
主权项 | 一种分离培养家禽内皮祖细胞的方法,其特征在于包括以下步骤:(1) 选取20日龄健康肉鸡,翅下静脉采集外周血;(2) 用L‑DMEM培养基按体积比1:1稀释外周血后,再按体积比1:1缓慢滴加到鸡淋巴细胞分离液中,2000 rpm离心15min后弃上清液,收集得到单个核细胞;(3) 将收集到的单个核细胞用L‑DMEM 培养基离心洗涤1‑2次,收集细胞,用EGM‑2培养基重悬细胞并计数;所述EGM‑2培养基含有体积百分比为10%的胎牛血清、100 IU/mL双抗以及血管内皮生长因子、表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子和胰岛素样生长因子‑1;(4) 分别将单个核细胞按5×107个/孔、1×107个/孔和1×106个/孔的量种植于用50μg/ml浓度的鼠尾胶原蛋白预先包被过的6孔细胞培养板中,置39℃、5% CO2培养箱中进行原代培养;每24h半量换液一次;5天后每24 h换液一次,7天后每48h换液一次直到传代。 | ||
地址 | 310058 浙江省杭州市西湖区余杭塘路388号 |