一种美味牛肝菌菌体中水溶性活性多糖的制备方法及应用

摘要

本发明公开了一种美味牛肝菌菌体中水溶性活性多糖的制备方法及应用，其制备步骤为：其步骤是：（1）将美味牛肝菌接种于固体斜面培养基，得到斜面种子；（2）取培养后的斜面接种到一级液体种子培养基中培养；（3）将培养的一级液体种子接种到二级液体种子中培养；（4）将培养的二级液体种子接种发酵；（5）将菌丝体与发酵液分离，得到菌丝体干粉；（6）将菌丝体干粉进行超声浸提，浓缩液体，收集美味牛肝菌多糖粗沉淀物；美味牛肝菌粗多糖沉淀物用水溶解，除去游离的蛋白质，浓缩，用乙醇沉淀，沉淀物干燥得到去蛋白后的美味牛肝菌胞内多糖沉淀物，所述的一种美味牛肝菌水溶性胞内多糖在制备治疗或预防细菌药物中的应用。本发明方法易行，操作简便，低温、短时、高效，制取的多糖具有较好的抗菌性。

主权项

一种美味牛肝菌菌体中水溶性活性多糖在制备治疗或预防细菌药物中的应用，所述的细菌为金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢肝菌、肠道沙门氏菌、巨大芽孢杆菌、肺炎双球杆菌；所述的美味牛肝菌菌体中水溶性活性多糖的制备方法如下：（1）将美味牛肝菌接种于固体斜面培养基，于25℃恒温培养6天，得到斜面种子，固体斜面培养基为%：马铃薯18‑24，葡萄糖1.0‑3.0，酵母粉1.0‑2.0，琼脂1.5‑2.5，蛋白胨0.4‑0.6，磷酸二氢钾0.05‑0.15，七水硫酸锌0.03‑0.07；（2）取培养后的斜面4‑5环接种到一级液体种子培养基，在250ml三角瓶，装液量为100ml，加10颗玻璃珠，于120r/min,25℃培养60小时，所述的培养基中各组分及其含量分别为%：马铃薯18‑24，葡萄糖1.0‑3.0，酵母粉1.0‑2.0，琼脂1.5‑2.5，蛋白胨0.4‑0.6，磷酸二氢钾0.05‑0.15，七水硫酸锌0.03‑0.07；（3）将培养60h后的一级液体种子按10%的接种量接种到二级液体种子，在250ml三角瓶，装液量为100ml，加10颗玻璃珠，于28℃，150r/min培养40h，所述的培养基与一级液体种子相同；（4）将培养40h后的二级液体种子按5%的接种量接种发酵，在250ml三角瓶，装液量为100ml，于28℃，180r/min培养98h，所述的发酵培养基成分为%：马铃薯8‑12，蔗糖1‑3，蛋白胨0.4‑0.8，磷酸二氢钾0.2‑0.4，七水硫酸镁0.1‑0.3，碳酸钙0.1‑0.3，或将培养40h后的二级液体种子按5%的接种量接种发酵，在250ml三角瓶，装液量为100ml，于28℃，180r/min培养98h，所述的发酵培养基成分为%：酵母膏0.8‑1.2，蛋白胨1.8‑2.2，葡萄糖1.8‑2.2；（5）将菌丝体与发酵液分离，清水冲净，于50℃烘干后研磨得到菌丝体干粉；（6）将菌丝体干粉加入去离子水40‑70℃进行浸提或加入去离子水40‑70℃进行超声浸提，浓缩液体，加入乙醇沉淀收集美味牛肝菌菌体多糖粗沉淀物；美味牛肝菌菌体粗多糖沉淀物用水溶解，再用sevag法反复除去游离的蛋白质，浓缩，用乙醇沉淀，沉淀物干燥得到去蛋白后的美味牛肝菌菌体中水溶性活性多糖沉淀物。