一种将多个DNA片段同时连接至同一载体上的方法

摘要

一种将多个DNA片段同时连接至同一载体上的方法，是依托Glass milk的DNA胶回收方法，将几个待连接的DNA片段PCR产物以及载体片段从凝胶上一同洗脱并回收，然后加入DNA连接酶与连接缓冲液，4℃连接过夜，将连接产物转化到感受态细胞中，实现重组克隆的增殖。本方法的连接过程无需考虑DNA片段浓度匹配问题，操作简单，周期短，价格低廉。

主权项

一种将多个DNA片段同时连接至同一载体上的方法，其特征在于，该方法步骤如下：a、首先根据载体和待连接DNA片段末端情况选择合适的限制性内切酶，再依该些待连接DNA片段来源的DNA基因组分别设计该些待连接DNA片段的引物，该些引物具有与前述限制性内切酶相应的酶切位点；b、以该些引物分别对该些待连接片段进行PCR扩增得到目的片段，沉淀DNA，用前述限制性内切酶分别消化载体和PCR扩增产物，将消化产物进行电泳检测；c、切下含有目的片段与载体的胶块置于同一离心管中，用标准Glass milk法回收DNA；d、以5×DNA连接缓冲液2μL、DNA连接酶1μl及上述载体与目的片段回收产物组成10μL的DNA连接反应体系，不足10μL时用ddH2O补足，4℃连接过夜。