一种适用于哺乳动物细胞的双顺反子表达载体及其应用

摘要

本发明公开了一种适用于哺乳动物细胞并能高效表达外源基因的双顺反子表达载体及其应用。该双顺反子表达载体包括5’-3’方向的连接元件。（1）开放阅读框1：包含依次排列的巨细胞病毒的早期启动子/增强子及内含子序列、多克隆位点、牛生长激素转录终止子序列；（2）开放阅读框2：包含依次排列的巨细胞病毒的早期启动子/增强子及内含子序列、多克隆位点、牛生长激素转录终止子及猿猴病毒启动子序列；（3）筛选标记基因、猿猴病毒SV40终止子序列。本发明的双顺反子载体具有高效的启动子，有效的转录终止信号，具有筛选与基因扩增标记，具有两个开放阅读框，提高了外源蛋白的表达效率，降低生产成本。

主权项

一种适用于哺乳动物细胞的双顺反子表达载体，所述载体包括以下5’‑3’方向的连接元件：（1）开放阅读框1：包含依次排列的巨细胞病毒早期启动子/增强子及内含子序列、多克隆位点、牛生长激素转录终止子序列；（2）开放阅读框2：包含依次排列的巨细胞病毒早期启动子/增强子及内含子序列、多克隆位点、牛生长激素转录终止子及猿猴病毒SV40启动子序列；（3）筛选标记基因、猿猴病毒SV40终止子序列，所述筛选标记基因选自二氢叶酸还原酶基因；所述开放阅读框1和开放阅读框2的巨细胞病毒早期启动子/增强子及内含子序列为SEQ ID NO：1；所述适用于哺乳动物细胞的双顺反子表达载体是由质粒Pcmob3H改造获得，所述哺乳动物细胞为中国仓鼠卵巢细胞。