用于亲和纯化的工程蛋白酶及融合蛋白的加工

摘要

本发明涉及鉴定能够以高亲和力结合相应蛋白酶的蛋白酶前结构域。本发明的前结构域融合到另一蛋白以形成蛋白酶前结构域融合蛋白。融合蛋白中存在蛋白酶前结构域蛋白使得可以通过用相应的蛋白酶温育而容易地和选择性地纯化第二蛋白。

主权项

编码融合蛋白的核酸构建物，其中该构建物包括目的蛋白的编码序列和枯草芽孢杆菌蛋白酶前结构域蛋白的编码序列，其中的融合蛋白包括与枯草芽孢杆菌蛋白酶前结构域蛋白的C‑末端可操作连接的目的蛋白，其中的枯草芽孢杆菌蛋白酶前结构域蛋白与枯草芽孢杆菌蛋白酶或其变体以10nM或更低的Kd结合形成稳定的复合物，并且其中的枯草芽孢杆菌蛋白酶或其变体有效切割来自枯草芽孢杆菌蛋白酶前结构域蛋白的目的蛋白，以及其中的枯草芽孢杆菌蛋白酶前结构域蛋白在切割目的蛋白后保持与枯草芽孢杆菌蛋白酶或其变体的结合，其中所述的枯草芽孢杆菌蛋白酶变体选自S149，S160，S188，S189，S190，S191，S193，S194，S196，S197，S198，S199，S201和S202，其中枯草芽孢杆菌蛋白酶前结构域蛋白通过用氨基酸序列FKAM、FKAY或FKAF替换P4至P1的氨基酸而进行修饰，或者枯草芽孢杆菌蛋白酶前结构域蛋白包括用作同源序列的氨基酸残基EEDKL(F/Y)QS(M/L/Y)。