主权项 |
一种异源精子诱导泥鳅雌核发育四倍体鱼苗的方法,其步骤如下:A、亲本的选取与人工催产选择体形正常、外表无伤、体质健壮、腹部膨大有弹性、卵巢轮廓明显的四倍体雌性泥鳅,雄性团头鲂胸鳍珠星明显、有粗糙感、轻压腹部有白色精液从生殖孔流出;B、精子的遗传灭活采集团头鲂精子,镜检选取活力在90%以上的用于紫外线灭活,团头鲂精液1ml,用Hank’s溶液按照1:4体积比稀释,置于经预冷的直径75mm干燥培养皿中,精液厚度为0.1‑0.2mm,然后置于2支15W紫外灯下处理;灯管与静液面距离10‑12mm,灭活时间20‑25min,精子的活力水平下降到30%时,停止光照,处理过的精液置于4℃冰箱中,避光保存备用;C、团头鲂精子诱导泥鳅雌核发育将稀释的精液200‑600µL 加入到含5‑30ml 四倍体泥鳅未受精卵的瓷盆中,混合均匀,随后加入5‑10ml 7% w/v 生理盐水,继续混匀后,加入50‑200ml 曝气水;D、冷休克处理:采用0‑4℃冰水混合物在授精后2‑10min进行冷休克处理,处理持续时间20‑55min;F.孵化受精卵经冷休克处理后,转移至23℃的水浴中复温;最后在曝气水中孵化;所述的曝气水为水温23‑25℃,溶氧6.0‑7.0mg/L,pH值在7.8‑8.2的自来水。 |