一种以碳纳米材料为受体的上转换荧光共振能量转移检测方法

摘要

本发明公开了一种以水溶性的上转换荧光纳米材料为荧光供体，以碳纳米材料为荧光受体荧光共振能量转移检测方法，具体步骤为：（1）制备水溶性上转换荧光纳米材料并对其进行表面标记，得到荧光供体溶液；（2）制备碳纳米材料，得到荧光受体溶液；（3）将荧光供体溶液和荧光受体溶液混合，孵育后，测定荧光强度，得到荧光猝灭曲线；（4）将一定浓度的荧光供体溶液和荧光受体溶液混合，孵育后，加入不同浓度的目标物，继续孵育后，测定荧光强度，绘制标准曲线；（5）根据标准曲线计算实际样品中目标物的浓度。本方法可以避免生物样本本底荧光的干扰，可以直接实现对血清或全血样品中目标物的检测，无需洗涤分离过程，检测速度快，成本低廉。

主权项

一种以碳纳米材料为受体的上转换荧光共振能量转移检测方法，其特征在于以水溶性的上转换荧光纳米材料为荧光供体，以碳纳米材料为荧光受体，按下列步骤操作：（1）制备水溶性的上转换荧光纳米材料并在其表面标记单链核酸、多肽或蛋白，将带有表面标记的上转换荧光纳米材料分散于缓冲液中，得到荧光供体溶液；（2）制备碳纳米材料，将碳纳米材料分散于溶剂中，得到荧光受体溶液；（3）将荧光供体溶液、荧光受体溶液和缓冲液按不同体积比混合后，得到荧光供体浓度相同、荧光受体浓度不同的各混合液，置于20～30℃孵育60～120min，在980nm激光器下测定各混合液的上转换荧光强度，得到荧光猝灭效率最大的混合液中所对应的荧光供体浓度和荧光受体浓度；（4）标准曲线绘制：取荧光供体浓度和荧光受体浓度分别为荧光猝灭效率最大时所对应的浓度的混合液7组，置于20～30℃孵育60～120min后，以其中一组混合液为空白样，向其余各组混合液中分别加入已知浓度的目标物，再置于37℃孵育90～120min；在980nm激光器下测定各组混合液的上转换荧光强度，空白样的荧光强度为F0，加入目标物的各组混合液的荧光强度为F，以（F‑F0）/F0为纵坐标，目标物在混合液中的浓度为横坐标，绘制标准曲线；（5）取步骤（4）所述荧光供体浓度和荧光受体浓度分别为荧光猝灭效率最大时所对应的浓度的混合液，20～30℃孵育60～120min，加入未知浓度的目标物样品，再置于37℃孵育90～120min后，测定混合液的荧光强度Fx，计算（Fx‑F0）/F0的值，代入步骤（4）得到的标准曲线，再计算得到样品中目标物的浓度。