一种提取铁皮石斛RNA的方法

摘要

本发明公开了一种铁皮石斛RNA的提取方法，包括下述过程：铁皮石斛幼嫩叶片低温研磨，利用CTAB提取缓冲液进行细胞裂解、离心分离过程，其特征在于：所述的铁皮石斛组织与提取液混合物经离心后的上清液，以等量的10MLiCl混合，静置后再离心分离、沉淀，再用Trizol法提取RNA的过程。由于本发明通过对现有的CTAB法进行改良，加入CTAB提取液充分裂解后直接利用等体积高浓度LiCl进行RNA沉淀，并同时利用高浓度LiCl去掉分离液中的多糖，不仅最大程度保留了RNA，同时也去除了大部分多糖，提高了RNA纯度。

主权项

一种提取铁皮石斛RNA的方法，其特征在于包括下述过程：用液氮冷却研钵将铁皮石斛幼嫩叶片研磨，充分研磨后，立即加入到预热好的CTAB提取缓冲液中，均匀摇动；将铁皮石斛组织与提取液混合物置于65℃水浴条件下20 min后，冷却至室温，4 ℃，12000 rpm离心10 min，其特征在于：它还包括下述步骤：a. 所述的铁皮石斛组织与提取液混合物经离心后的上清液，以等量的10 M LiCl混合，溶液在4 ℃条件静置8‑12小时，4 ℃条件下，12000 rpm离心20 min；b. 上清液，用75%乙醇清洗沉淀，在4 ℃条件下，12000 rpm离心5 min，弃上清液；c.  SSTE溶解沉淀，然后加入trizol，摇匀后加入氯仿，4 ℃条件下，12000 rpm离心10 min；d. 上清液，加入与上清液等体积氯仿与异戊醇的混合液，其中氯仿：异戊醇按24：1比例配合，在4 ℃条件下，12000 rpm离心10 min；e. 取上清液，加与上清液等体积异丙醇，‑20 ℃沉淀至少20 min， 4 ℃条件下，12000 rpm离心10 min；f. 弃上清，用500 uL的75%乙醇清洗沉淀，连续洗涤两次，干燥沉淀，得纯铁皮石斛RNA。