一种党参愈伤组织和悬浮细胞的快速繁殖方法

摘要

本发明公布了一种党参愈伤组织和悬浮细胞的快速繁殖方法，包括无菌外植体的获得、愈伤组织的诱导、悬浮细胞培养、水杨酸调控悬浮细胞中酶的活性及党参多糖含量等步骤，本发明方法所制备的党参悬浮细胞中含有较高含量的党参多糖。本发明方法利用水杨酸对党参悬浮细胞进行有目的的调控，可以在短期内获得大量的制药原料，并能有效降低生产成本。

主权项

一种党参愈伤组织和悬浮细胞的快速繁殖方法，包括无菌外植体的获得、愈伤组织的诱导、悬浮细胞培养、水杨酸调控党参悬浮细胞中多糖的含量，其主要步骤如下：（1）按照植物组织培养常规消毒方法对野外采取的党参外植体材料进行消毒处理，获得无菌的外植体；（2）将步骤（1）获得的无菌党参叶片，芽接种到愈伤组织诱导培养基中进行愈伤组织诱导，诱导出来的愈伤组织继代培养4‑5代，获得嫩绿松散的愈伤组织；（3）将步骤（2）获得的嫩绿松散的愈伤组织用镊子夹取接种在附加激素0.2‑1 mg/L IAA和0.5‑2 mg/L KT的B5培养基中进行震荡悬浮培养，形成稳定的细胞系；（4）将步骤（3）获得的党参悬浮细胞接种入B5+0.5mg/LIAA+2mg/LKT+水杨酸1‑3mg/L，收集党参悬浮细胞称重，然后分两份，一份‑70℃冰箱保存鲜样测酶的活性，一份60℃烘干保存干样，对党参多糖进行提取，检测。