一种快速制备DNA结合蛋白的技术

摘要

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种制备DNA结合蛋白的技术。本发明是以高浓度的盐溶液提取DNA-蛋白质复合物，再利用DNA-蛋白质复合物难溶于低浓度盐溶液的特点使DNA-蛋白质复合物析出，再应用丙酮-三氯乙酸除去DNA等杂质，即可获得DNA结合蛋白，为研究DNA与蛋白质相互作用提供了可靠的技术平台。

主权项

一种快速制备DNA结合蛋白的技术，其特征在于该方法为：（1）DNA‑蛋白质复合物的提取：采用各种方法破碎的细胞，加入一定体积的DNA‑蛋白质复合物提取液，充分混匀，静止2小时以上，然后离心，取上清，其中提取液含有1‑1.4mol/LNaCl、0.1 mol/L的EDTA、0.1‑0.2g/L的PMSF和缓冲液，pH7.5，所述缓冲液为0.01 mol/L的 Tris‑HCl或0.1 mol/L 磷酸缓冲液；（2）DNA‑蛋白质复合物的析出：降低上清溶液中盐的浓度，在低温条件下静止，待DNA‑蛋白质复合物析出，然后离心，取沉淀；（3）DNA结合蛋白的制备：取沉淀，加入一定体积的DNA结合蛋白制备溶液，混匀，‑20℃条件下静止2小时以上，然后离心，取沉淀，沉淀用少量丙酮溶液分散，再采用低温冷冻干燥，获得纯净的DNA结合蛋白，其中所述的制备溶液为含有1%三氯乙酸的丙酮溶液。2.根据权利要求1的方法，步骤（2）中所述降低上清溶液中盐的浓度通过稀释或透析方法达到。3.根据权利要求1的方法，步骤（2）中所述的低温条件是指2—6℃。