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一种基于电化学阻抗分析的气味结合蛋白传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）加工叉指金电极阻抗传感器：以玻璃为基底，在玻璃上磁控溅射钛化钨薄膜作为粘附层，接着磁控溅射金薄膜作为电极层；用AZ光刻胶光刻出电极图形后，采用干法刻蚀将非电极区域刻蚀掉，得到叉指金电极，最后将芯片腔用环氧树脂胶封在玻璃基底上，制得叉指金电极阻抗传感器；（2）固定气味结合蛋白：首先，依次使用无水乙醇和超纯水超声清洗步骤1得到的叉指金电极阻抗传感器5 min，用氮气吹干；配制硝酸纤维素膜甲醇溶液，其中，硝酸纤维素膜的面积与甲醇溶液的体积比为1:5（单位：mm2/μl）；取15μl硝酸纤维素膜甲醇溶液均匀滴加在叉指金电极上，等待5 min甲醇挥发后，叉指金电极上形成一层用于固定蛋白的硝酸纤维素膜；之后，加入15 μl 的浓度为500 μg/ml 的气味结合蛋白溶液，其中气味结合蛋白选取的是中华蜜蜂气味结合蛋白Acer‑ASP2，溶剂为0.1M PBS缓冲液（pH=7.2，0.1M指的是PBS缓冲液中磷酸盐的摩尔浓度），室温下静止2h，使得中华蜜蜂气味结合蛋白Acer‑ASP2与硝酸纤维素膜作用后固定在硝酸纤维素膜上；从芯片腔的进/出液口以恒定的速率（20 μl/s）缓慢通入PBS缓冲液，PBS缓冲液流入腔体后从另一进出口流出，用于清洗未被固定的中华蜜蜂气味结合蛋白Acer‑ASP2，持续10 min后即可获得基于电化学阻抗分析的气味结合蛋白传感器，放在4℃条件下备用。 |
