主权项 |
一种高纯度鲟鱼硫酸软骨素的制备方法,其特征是,包括以下步骤: (1)预处理:以新鲜鲟鱼头骨和脊骨为原料,将其放入锅中水煮1小时,取出放冷后剔除头部、脊索软骨上残留的肌肉、脂肪和其他结缔组织,用10倍量(v/m)95%乙醇浸泡2小时,之后更换乙醇重复浸泡一遍,冷冻干燥后粉碎备用。 (2)酶解:将步骤(1)中所得鲟鱼软骨粉溶于25倍量(v/m)pH值为7的氯化钠溶液中,碳酸钠溶液pH值用12mol/L盐酸溶液调节。向溶液中加入硫酸软骨素提取专用酶进行酶解,酶解完后煮沸10分钟使酶失活,之后加入碱性蛋白酶进行酶解,酶解完后煮沸10分钟使酶失活,过滤收集酶解液。 (3)三氯乙酸除蛋白:将步骤(2)中的酶解液进行冷却,冷却至4℃后向其中加入1/19倍量(v/v)6.1mol/L三氯乙酸。静置3小时沉淀析出,之后于4℃离心15分钟收集滤液。 (4)醇沉、干燥:向步骤(3)中的滤液中加入4倍量(v/v)乙醇,于4℃离心15分钟收集沉淀,将沉淀在80℃烘干后得到鲟鱼硫酸软骨素粗品。 (5)季铵盐沉淀:将(4)中的硫酸软骨素粗品溶解于50倍量(m/m)水中,向其中加入氯化十六烷吡啶进行混合,于4℃离心15分钟收集沉淀。 (6)醇沉:将步骤(5)中的沉淀溶解于62.5倍量(v/m)2.5mol/L的氯化钠溶液中,向其中加入乙醇,于4℃离心15分钟收集沉淀。 (7)膜透析、干燥:将步骤(6)中的沉淀溶解于100倍量(v/m)水中,将溶液用截留分子量为7000Da透析袋进行透析。将透析液于‑50℃真空干燥后即得硫酸软骨素纯品。 |