发明名称 |
一种鱼类溶藻弧菌抗独特型抗体基因工程疫苗及其制备方法 |
摘要 |
本发明所述的一种鱼类溶藻弧菌抗独特型抗体基因工程疫苗,其特征在于,利用鱼类溶藻弧菌抗独特型抗体的杂交瘤细胞株(2F4)中克隆出重链(VH)和轻链(VL)可变区基因,通过基因重组构建scFv及原核表达载体PET32a-AL,转化大肠杆菌BL21后用IPTG诱导表达。表达后的重组蛋白利用动物免疫试验进行免疫原性鉴定。scFv基因序列全长747碱基对,编码249个氨基酸,符合小鼠免疫球蛋白可变区基因特征,含有框架区(FRs)、抗原互补决定区(CDRs)及抗体特征性的半胱氨酸残基。ELISA测定和动物免疫试验显示抗独特性抗体的scFv具有与溶藻弧菌一样的免疫原性。 |
申请公布号 |
CN103463645A |
申请公布日期 |
2013.12.25 |
申请号 |
CN201210183806.X |
申请日期 |
2012.06.06 |
申请人 |
付建芳;涂艳阳;付菊芳;黄威权 |
发明人 |
付建芳;黄威权;涂艳阳;付菊芳 |
分类号 |
A61K48/00(2006.01)I;A61K39/40(2006.01)I;A61P31/04(2006.01)I;C12N15/13(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I;C07K16/12(2006.01)I |
主分类号 |
A61K48/00(2006.01)I |
代理机构 |
|
代理人 |
|
主权项 |
1.一种鱼类溶藻弧菌抗独特型抗体基因工程疫苗,其特征在于,利用鱼类溶藻弧菌抗独特型抗体的杂交瘤细胞株克隆出重链(V<sub>H</sub>)和轻链(V<sub>L</sub>)可变区基因,用(Gly<sub>4</sub>Ser)<sub>3</sub>组成的连接肽(linker)连接V<sub>H</sub>和V<sub>L</sub>,构建V<sub>H</sub>-linker-V<sub>L</sub>形式的单链抗体scFv基因,在大肠杆菌中表达,获得鱼类溶藻弧菌抗独特型抗体基因工程疫苗,基因序列全长747碱基对,编码249个氨基酸,其基因序列和氨基酸序列如下:1 cg gccgaggtgaagA E V K15 ctgaaggagtctggggctgagctggtaaggcctgggacttcagtgL K E S G A E L V R P G T S V60 aaggtgtcctgcaaggcttctggatacgcctttactaattacttgK V S C K A S G Y A F T N Y L------------CDRH1-----105 atagagtgggtaaagcagaggcctggacagggccttgagtggattI E W V K Q R P G Q G L E W I----150 ggagtgattaatcctggaagtggtggtactaactacaatgagaagG V I N P G S G G T N Y N E K----------------------CDH2---------------195 ttcaagggcaaggcaacactgactgcagacaaatcctccagcactF K G K A T L T A D K S S S T-------240 gcctacatgcagctcagcagcctgacatctgatgactctgcggtcA Y M Q L S S L T S D D S A V285 tatttctgtgcaagagggcggttcccccattactatgctatggacY F C A R G R F P H Y Y A M D---------------CDRH3----------330 tactggggtcaaggaacctcagtcaccgtgtcgtcgggtggaggcY W G Q G T S V T V S S G G<img file="FSA00000729382500011.GIF" wi="48" he="80" />--375 ggcggcggctccggtggtggtggatccggtggtggtggttct gac<img file="FSA00000729382500021.GIF" wi="885" he="73" />D420 atccagatgacacagactccactctccctgcctgtcagtcttggaI Q M T Q T P L S L P V S L G465 gatcaagcctccatctcttgcggatctagtcagagccttgtacacD Q A S I S C G S S Q S L V H---------------CDRL1----510 agtaatggaaacacctatttacattggtacctgcagaagccaggcS N G N T Y L H W Y L Q K P G----------------------555 cagtctccaaagctcctgatctacaaagtttccaaccgattttctQ S P K L L I Y K V S N R F S---------CDRL2-------600 ggggtcccagacaggttcagtggcagtggatcagggacagatttcG V P D R F S G S G S G T D F645 acactcaagatcagcagagtggaggctgaggatctgggagtttatT L K I S R V E A E D L G V Y690 ttctgctctcaaagtacacatgttccgctcacgttcggtgctgggF C S Q S T H V P L T F G A G---------CDRL3-----------730 accaagctggagctgaaacgt750T K L E L K R其中,划线部分是互补决定区(CDR1、CDR2、CDR3),斜体是特征性的半胱氨酸,方框内为连接肽序列。 |
地址 |
710032 陕西省西安市长乐西路127号 |