六种台勾霉素类化合物及其制备方法和在制备抗菌药物中的应用

摘要

本发明公开了六种台勾霉素类化合物及其制备方法和在制备抗菌药物中的应用。本发明以指孢囊菌NRRL 18085作为原始菌，对该菌的tiaS5-氧甲基转移酶基因实行敲除，获得tiaS5-氧甲基转移酶基因敲除突变株(TCM70)。对突变株发酵产物粗提物采用正相硅胶、反相硅胶、凝胶等柱层析色谱技术和制备薄层层析色谱技术等，从突变株TCM70得到化合物1-6。这六种化合物对金黄色葡萄球菌，苏云金芽孢杆菌，粪肠球菌等都具有较好的抑制活性。与母体化合物台勾霉素B相比较，化合物1和6均对粪肠球菌和金黄色葡萄球菌具有较低的MIC值，表明它们具有更好的抑菌活性，特别是化合物6，其针对金黄色葡萄球菌的活性比母体化合物台勾霉素B提高了8倍，因此有望研发成为抗菌新药。

主权项

1.一种如式（1）所示的六种台勾霉素类化合物的制备方法，其特征在于：将大孔树脂加入对指孢囊菌Dactylosporangium aurantiacum subsp.hamdenensis NRRL18085的tiaS5-氧甲基转移酶基因进行敲除后的tiaS5-氧甲基转移酶基因敲除突变株TCM70的培养基中，经发酵培养后，分离出发酵液中的大孔树脂，经乙醇洗脱，乙醇提取物经浓缩回收乙醇后，用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层经浓缩后得代谢产物粗提物，将该粗提物经硅胶柱层析，以体积比从100:0～5:1的氯仿-甲醇作为洗脱剂梯度洗脱，收集氯仿-甲醇体积比为100:1-20:1梯度下洗脱下来的馏分，再经凝胶柱层析，以体积比1:1的氯仿-甲醇作为洗脱剂洗脱，进而用ODS反相中压液相色谱，YMC*GEL ODS-A球型填料，120A孔径，50um粒径，40×2.5cm I.D.，流速为20ml/min，以体积分数从10%-85%的乙腈/水梯度洗脱，其中以体积分数从55%-60%的乙腈/水梯度洗脱下来的为馏分1，以体积分数从60%-65%的乙腈/水梯度洗脱下来的为馏分2，以体积分数从65%-70%的乙腈/水梯度洗脱下来的为馏分3，以体积分数从70%-75%的乙腈/水梯度洗脱下来的为馏分4，以体积分数从75%-80%的乙腈/水梯度洗脱下来的为馏分5，以体积分数从80%-85%的乙腈/水梯度洗脱下来的为馏分6；馏分1经ODS反相中压液相色谱，YMC*GEL ODS-A球型填料，120A孔径，50um粒径，20×2.5cm I.D.，流速为15ml/min，以体积分数从10%-65%的乙腈/水梯度洗脱，收集体积分数60-65%的乙腈/水梯度洗脱下来的馏分，再用硅胶柱层析，以体积比为8：1的氯仿-甲醇为洗脱剂洗脱，收集馏分，得到化合物5；馏分2经ODS反相中压液相色谱，YMC*GEL ODS-A球型填料，120A孔径，50um粒径，40×2.5cm I.D.，流速为20ml/min，以体积分数从10%-68%的乙腈/水梯度洗脱，收集体积分数65-68%的乙腈/水梯度洗脱下来的馏分，再用制备薄层层析，以体积比为8:1的氯仿-甲醇作为展开剂展开，收集RF值为0.45的馏分，得到化合物2；馏分3经制备薄层层析，以体积比为8:1的氯仿-甲醇作为展开剂展开，收集RF值为0.5的馏分，而后经凝胶柱层析，以体积比1:1的氯仿-甲醇作为洗脱剂洗脱，得到化合物3；馏分4经制备薄层层析，以体积比为10:1的氯仿-甲醇作为展开剂展开，收集RF值为0.5的馏分，后经半制备高效液相色谱，以体积比为65%的乙腈/水洗脱，流速3ml/min，收集保留时间为40.5min的馏分，最后经制备薄层层析，以体积比为10:1的氯仿-甲醇作为展开剂展开，收集RF值为0.55的馏分，得到化合物4；馏分5经ODS反相中压液相色谱，YMC*GEL ODS-A球型填料，120A孔径，50um粒径，40×2.5cm I.D.，流速为20ml/min，以体积分数从10%-75%的乙腈/水梯度洗脱，收集体积分数70-75%的乙腈/水梯度洗脱下来的馏分，再用制备薄层层析，以体积比为10:1的氯仿-甲醇作为展开剂展开，收集RF值为0.6的馏分，得到化合物1；馏分6经制备薄层层析，以体积比为10:1的氯仿-甲醇作为展开剂展开，收集RF值为0.65的馏分，后经ODS反相中压液相色谱，YMC*GEL ODS-A球型填料，120A孔径，50um粒径，20×2.5cm I.D.，流速为15ml/min，以体积分数从10%-78%的乙腈/水梯度洗脱，收集体积分数75-78%的乙腈/水梯度洗脱下来的馏分，然后用硅胶柱层析，以体积比为50：1的乙酸乙酯-甲醇作为流动相洗脱，得到化合物6；其中化合物1：R₁=Z，R₂=H，R₃=ET；化合物2：R₁=Z，R₂=OH，R₃=ET；化合物3：R₁=X，R₂=H，R₃=ET；化合物4：R₁=Y，R₂=H，R₃=ET；化合物5：R₁=Z，R₂=OH，R₃=Me；化合物6：R₁=Z，R₂=Me，R₃=Et。