一种高效液相色谱检测血液中丙戊酸钠含量的方法

摘要

本发明涉及生物医疗技术领域，提供了一种高效液相色谱检测血液中丙戊酸钠含量的方法，包括配制37.6μg/ml的丙戊酸钠标准溶液、多种浓度丙戊酸钠工作液、配制50.2μg/ml的环己烷羧酸内标溶液、空白标样、正常人血液标样、病人血液标样，放入色谱仪里绘制色谱图，根据色谱图判断病人血液里面是否含有丙戊酸钠；然后色谱仪根据正常人血液标样色谱图绘制丙戊酸钠标准曲线，再根据病人血液标样色谱图的丙戊酸钠峰值、环己烷羧酸内标溶液的峰值、丙戊酸钠标准曲线计算出病人血液中丙戊酸钠的含量。本发明有效解决了色谱图中杂峰多、灵敏度低、精确度低、成本高、不能绘制出丙戊酸钠标准曲线的问题。

主权项

本发明的一种高效液相色谱检测血液中丙戊酸钠含量的方法，其特征在于，包含以下步骤： 第一步，配制37.6μg/ml的的丙戊酸钠标准溶液；首先，称取分析纯丙戊酸钠37.6mg，放入50mL容量瓶中，然后将0.2mol/l的分析纯氨水倒入装有丙戊酸钠的容量瓶中，稀释至50ml刻度为止，摇匀；第二步，稀释丙戊酸钠标准溶液，制成丙戊酸钠工作液；从第一步中的50ml丙戊酸钠标准溶液容量瓶中，分别取出200μl装入8个容量瓶中，向这8个容量瓶中倒入0.2mol/l的分析纯氨水，将丙戊酸钠标准溶液分别稀释成浓度为18.80、37.60、56.40、75.20、94.00、112.80、127.84、150.40μg/ml的丙戊酸钠工作液备用；第三步，配制50.2μg/ml的的环己烷羧酸内标溶液；首先，称取分析纯环己烷羧酸37.6mg，放入50mL容量瓶中，然后将0.2mol/l的分析纯氨水倒入装有环己烷羧酸的容量瓶中，稀释至50ml刻度为止，摇匀；第四步，配制5.016mg/ml衍生化试剂，并放置于冰箱中贮存；首先，称取分析纯w‑溴苯乙酮125.4mg，放入25mL容量瓶中，然后将色谱纯乙腈倒入装有w‑溴苯乙酮的容量瓶中，稀释至25ml刻度为止，摇匀，放置于冰箱中贮存；第五步，配制1000ml流动相；首先将750ml分析纯甲醇倒入1000ml的容量瓶中，然后向装有甲醇的容量瓶中倒入250ml去离子水，摇匀；第六步，取200μl正常人的血清加入10ml具塞抽提管中，作为空白标样；第七步，取200μl正常人的血清加入10ml具塞抽提管中，然后量取30μl环己烷羧酸内标溶液，倒入装有正常人血清的具塞抽提管中，作为标样1；第八步，取200μl正常人的血清加入10ml具塞抽提管中，然后量取200μl丙戊酸钠标准溶液，倒入装有正常人血清的具塞抽提管中，作为标样2；第九步，取200μl正常人的血清加入10ml具塞抽提管中，然后量取30μl环己烷羧酸内标溶液和200μl丙戊酸钠标准溶液，依次倒入装有正常人血清的具塞抽提管中，作为标样3；第十步，分别取200μl正常人的血清加入8支10ml具塞抽提管中，然后这8支具塞抽提管中分别加入30μl环己烷羧酸内标溶液和200μl的18.80、37.60、56.40、75.20、94.00、112.80、127.84、150.40μg/ml的丙戊酸钠工作液，作为标样4、5、6、7、8、9、10、11；第十一步，取200μl病人的血清加入10ml具塞抽提管中，然后量取30μl环己烷羧酸内标溶液，倒入装有病人血清的具塞抽提管中，作为标样12；第十二步，首先分别向空白标样、标样1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12中加入200μl的1mol/l硫酸，摇匀后再分别加入4ml色谱纯正己烷，都漩涡混匀5分钟，静置5分钟后，分别进行3000r/min的离心运动10分钟；第十三步，分别从离心后的空白标样、标样1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12中移取2ml上清液至13支洁净的10ml具塞抽提管中，分别向13支具塞抽提管中加入40μl衍生化试剂、20μl分析纯三乙胺，漩涡混匀后，放置于63℃水浴衍生10分钟，然后在氮气流下蒸发至完全干燥； 第十四步，首先将取出的残留物分别用300μl流动相漩涡混匀、溶解，然后将溶解物分别吸入13支尖底离心管中，进行4000r/min离心运动10分钟；第十五步，分别从13支尖底离心管中取出15μl，放入13支试管中，再将13支试管放入色谱仪中进行光谱测量，得出13张色谱图；第十六步，根据空白标样、标样1、标样2、标样3的比较可以判断出环己烷羧酸内标溶液的峰值，丙戊酸钠标准溶液的峰值；进一步地，根据标样3的色谱图可以判断出标样12中是否含有丙戊酸钠产生的峰，随即判断出病人血液中是否含有丙戊酸钠；进一步地，色谱仪根据标样4、5、6、7、8、9、10、11的色谱图，绘制出丙戊酸钠标准曲线，色谱仪根据标样12的丙戊酸钠峰值、环己烷羧酸峰值与丙戊酸钠标准曲线，可以计算出病人血液内的丙戊酸钠含量。