一种生物素标记兔抗罗非鱼IgM多克隆抗体的制备方法及应用

摘要

一种生物素标记兔抗罗非鱼IgM多克隆抗体的制备方法，含以下步骤：采集罗非鱼血清经纯化处理得纯化的罗非鱼IgM；将罗非鱼IgM免疫兔得兔抗罗非鱼IgM多克隆抗体，采用ELISA检测兔抗罗非鱼IgM多克隆抗体的抗罗非鱼血清效价；将纯化的罗非鱼IgM加强免疫后，收集、分离得含有兔抗罗非鱼IgM多克隆抗体的血清，经纯化处理，加入生物素混匀，得生物素标记兔抗罗非鱼IgM多克隆抗体；采用该法制成的生物素标记兔抗罗非鱼IgM多克隆抗体特异性好，纯度和效价高，能与罗非鱼IgM发生特异性结合反应；还公开了上述方法制成的生物素标记兔抗罗非鱼IgM多克隆抗体在ELISA中的应用及在Western-Blot中的应用。

主权项

一种生物素标记兔抗罗非鱼IgM多克隆抗体的制备方法，其特征是含以下步骤：(1)选取健康罗非鱼的尾动脉血，静置使血清充分析出，离心，取上清，得罗非鱼血清；(2)取罗非鱼的血清，用等体积PBS稀释后，加入饱和硫酸铵搅拌处理，离心，取沉淀，溶解后，进行纯化处理，得纯化的罗非鱼IgM；(3)第一次免疫时，按200μg/只SPF级新西兰兔的免疫剂量，取步骤(2)纯化的罗非鱼IgM与等体积的完全弗氏佐剂混合，充分乳化后在SPF级新西兰兔背部皮下进行多点注射免疫，10‑14天后进行第二次、第三次以及第四次免疫，第二、三、四次免疫是将纯化的罗非鱼IgM按200μg/只SPF级新西兰兔的免疫剂量与等体积的不完全弗氏佐剂混合，充分乳化，在新西兰兔背部皮下多点注射免疫，每次间隔10‑14天，第四次免疫后第10天，对免疫的新西兰兔耳静脉采血，ELISA检测新西兰兔血清中抗罗非鱼IgM抗体的效价；(4)四免后，用纯化的罗非鱼IgM按100μg/只的免疫剂量加强免疫新西兰兔，2～4天内进行心脏采血，收集、分离得到含有抗罗非鱼IgM的兔多克隆抗体的血清，再经纯化处理，得兔抗罗非鱼IgM多克隆抗体，将兔抗罗非鱼IgM多克隆抗体与生物素混匀，获得生物素标记兔抗罗非鱼IgM多克隆抗体。