发明名称 |
一种新型细胞因子融合蛋白IP10单链抗体的制备方法 |
摘要 |
本发明公开了一种新型细胞因子融合蛋白——趋化因子干扰素诱导蛋白10单链抗体的制备方法,包括以下步骤:S1、合成人源性IP10胞外端基因;S2、利用重组噬菌体抗体系统构建抗表皮生长因子受体突变体III(EGFRvIII)的单链抗体;S3、对(Gly4Ser)3柔性接头进行优化合成;S4、将IP10和抗EGFRvIII单链抗体依次克隆于真核表达载体中,并通过优化的(Gly4Ser)3柔性接头连接,获得IP10-scFv基因;S5、将该基因在大肠杆菌中高效表达,获得生物学活性的IP10-scFv。本发明的IP10-scFv具有更高的抗原-抗体结合率,临床上可以减少IP10用量,降低其毒副作用,进而还可以减少胶质瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)过继输入的数量和提高CTL活性。 |
申请公布号 |
CN103451218A |
申请公布日期 |
2013.12.18 |
申请号 |
CN201210168346.3 |
申请日期 |
2012.05.28 |
申请人 |
卢小玲;赵永祥 |
发明人 |
卢小玲;赵永祥;王旋;姜晓兵 |
分类号 |
C12N15/70(2006.01)I;C07K19/00(2006.01)I;A61K49/00(2006.01)I;C12R1/19(2006.01)N |
主分类号 |
C12N15/70(2006.01)I |
代理机构 |
深圳市顺天达专利商标代理有限公司 44217 |
代理人 |
周娇娇 |
主权项 |
一种新型细胞因子融合蛋白IP10单链抗体的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括以下步骤:S1、根据基因库合成人源性IP10胞外端编码基因;S2、利用重组噬菌体抗体系统构建抗表皮生长因子受体突变体III的单链抗体,并测定其基因序列;S3、对(Gly4Ser)3柔性接头进行胸腺嘧啶‑腺嘌呤序列替换部分鸟嘌呤‑胞嘧啶序列的优化合成,并克隆于真核表达载体中;S4、将所述IP10胞外端编码基因和抗表皮生长因子受体突变体III的单链抗体基因依次克隆于所述真核表达载体中,并通过所述优化合成的(Gly4Ser)3柔性接头相连接,获得IP10单链抗体的编码基因;S5、将所述IP10单链抗体的编码基因在大肠杆菌中表达,获得IP10单链抗体。 |
地址 |
530021 广西壮族自治区南宁市双拥路22号453栋1单元1204房 |