重金属胁迫下黄孢原毛平革菌体内CYP450含量的测定方法

摘要

本发明公开了一种重金属胁迫下黄孢原毛平革菌体内CYP450含量的测定方法，该方法包括（1）将黄孢原毛平革菌的孢子悬液接种至Kirk培养基中进行恒温振荡培养，然后加入重金属废水进行胁迫培养，得到菌丝球；（2）将菌丝球加入Tris-HCl缓冲液中进行超声破碎、差速离心和溶解，得到微粒体溶液；（3）取微粒体溶液作为待测样品先通入CO，再加入连二亚硫酸钠，再次通入CO，静置后，扫描待测样品在400nm～500nm的吸光度，计算重金属胁迫下黄孢原毛平革菌体内CYP450的含量。本发明的检测方法简单、可行、快捷、有效、且可靠。

主权项

一种重金属胁迫下黄孢原毛平革菌体内CYP450含量的测定方法，包括以下步骤：（1）菌丝球的培养：将黄孢原毛平革菌（Phanerochaete chrysosporium）的孢子悬液接种至Kirk培养基中进行恒温振荡培养，恒温振荡培养后向含黄孢原毛平革菌的Kirk培养基中加入重金属废水进行胁迫培养，胁迫培养后过滤并用Tris‑HCl缓冲液洗涤，得到重金属胁迫后的黄孢原毛平革菌菌丝球；（2）微粒体的提取：将上述重金属胁迫后的黄孢原毛平革菌菌丝球加入Tris‑HCl缓冲液中在冰浴下进行超声破碎，得到破碎液，对破碎液进行差速离心，得到微粒体沉淀物，将微粒体沉淀物溶解于Tris‑HCl缓冲液中，得到微粒体溶液；（3）CYP450含量的测定：用Bradford法对上述微粒体溶液中的总蛋白质浓度进行测定，取两份微粒体溶液作为待测样品和对照样品分别加入样品池和对照池中进行基线调零，然后向样品池的待测样品中先通入CO，再加入连二亚硫酸钠，再次通入CO，静置后，扫描待测样品在400nm～500nm的吸光度，通过微粒体溶液中的总蛋白质浓度和待测样品在450nm处的吸光度计算重金属胁迫下黄孢原毛平革菌体内CYP450的含量。